孔德真，华东来，王秀珍，刘步仓，祝建波，王爱英

(新疆石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832000)

dGFP-GUS基因标记新疆棉花黄萎病原菌的研究

孔德真，华东来，王秀珍，刘步仓，祝建波，王爱英

(新疆石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832000)

【目的】研究棉花黄萎病原菌的入侵机理。【方法】以带有潮霉素抗性筛选基因的PUCCATPH载体以及pCAMBIA1304载体作为骨架，构建trpc启动子驱动的GFP-GUS基因的新疆棉花黄萎病菌表达载体1304-P-ORF，导入农杆菌GV3101和AGL-1中。通过农杆菌介导(ATMT)法分别转入新疆棉花黄萎病原菌VD-1和VD-278中，对表达效果进行检测。【结果】筛选的潮霉素B浓度为30 μg/mL，农杆菌AGL-1对黄萎病菌的转化效率比GV3101高40%。T0代经含有潮霉素B的PDA培养基筛选，获得了T1代转基因大丽轮枝菌VD-12株，VD-2 784株。通过GUS组织染色，在转基因VD-1和VD-278的菌丝和孢子中均可观察到GUS基因的表达。对转基因黄萎菌进行PCR分子检测，均可检测到GFP和潮霉素B基因。GUS-GFP和潮霉素B基因已成功转入新疆棉花黄萎菌VD-1和VD-278中。【结论】建立了新疆棉花黄萎菌的遗传转化体系，为进一步利用GFP-GUS基因研究新疆棉花黄萎菌对棉花侵染的过程奠定基础。

trpc启动子；农杆菌介导转化；GFP-GUS；棉花黄萎病菌

0 引 言

【研究意义】棉花黄萎病是由大丽轮枝菌(Verticilliumdahliae)引起的一种真菌性维管束系统病害[1]。当生长正常的植物被大丽轮枝菌侵染后，在植物木质部的导管系统中大量繁殖，使植物水分运输蒸腾阻力增大，从而减少植物叶片组织中水分供应，进而使植物的光和速率和蒸腾速率减慢[2]。机械障碍和毒素作用现在已经被认为是黄萎病菌致病的两个主要原因。……