李美霞谢书阳

1滨州医学院基础医学院 山东省烟台市 264003 2山东省高青县人民医院 山东省高青县 256300

宫颈癌组织CX43和Vimentin的表达与临床意义研究

李美霞1,2谢书阳1

1滨州医学院基础医学院 山东省烟台市 264003 2山东省高青县人民医院 山东省高青县 256300

目的：检测正常宫颈组织和CIN及宫颈癌病灶中的CX43和Vimentin表达水平，分析二者与临床病理指标之间的关系。方法：收集2014年1月-2015年6月年高青县人民医院妇产科手术切除的33例宫颈癌、32例CIN及16例正常宫颈组织标本作为对照组，试验对象术前均未进行化疗与放疗，且均行HPV检查。采用免疫荧光与Western Blot方法检测CX43和Vimentin在3种组织中的表达水平。结果：（1）Cx43在对照组、CIN（I、II-III及宫颈癌中的阳性表达率分别为68.8%、66.7%、65%、27.3%，宫颈癌组cx43表达明显低于对照组（p=0.006）；cx43在宫颈癌静脉侵犯组的表达率显著低于未侵犯组：13%VS60%，（p=0.018）；在淋巴结侵犯组的表达率显著低于未侵犯组：9.1%和63.6%，（p=0.004）。（2）Vimentin在对照组、CIN（I、II-III及宫颈癌中的阳性表达率分别为12.5%、25%、50%、69.7%，进行X2检验显示阳性表达率有显著性差异（p=0.024）；Vimentin在宫颈癌侵犯静脉组的表达率显著高于未侵犯静脉组：90.9%VS27.3%，（p=0.001）；在宫颈癌淋巴结侵犯组的表达率显著高于淋巴结未侵犯组：86.4%和36.4%，（p=0.011）。（3）spearman相关分析显示cx43与Vimentin的表达呈负相关（r=-0.485，p=0.004）。结论：CX43表达降低和Vimentin表达增多与宫颈癌恶性程度相关，Vimentin与CX43的表达呈负相关联系。

宫颈癌；CIN；免疫荧光组织化学；Western Blotting；CX43；Vimentin

宫颈癌位于乳腺癌之后为第二普遍性癌症，随着宫颈癌分子遗传学的进展已经揭示癌症的形成是多步骤过程，并且涉及到多种基因的改变。最近的证据已经证明：EMT已经被发现与主要的癌症类型具有联系并且与生性生殖系统癌症之间的联系要比其他癌症更为普遍[1]。CX43与vimentin是目前研究比较深入的癌症相关细胞因子，在肿瘤增殖、浸润与转移过程各自发挥重要的作用，但是在宫颈癌中的两者的研究比较少见，且与临床病理特征之间的关系没有统一结论。

1 材料和方法

1.1 临床研究对象

收集2014年1月-2015年6月高青县人民医院手术切除33例宫颈癌、32例CIN及16例正常宫颈组织标本，试验对象术前均未进行化疗与放疗，且均行HPV检查。患者平均年龄为（49.5±12.3）岁。归类如下：宫颈癌33例，其中宫颈癌细胞侵犯静脉系统23例，无侵犯静脉10例，有淋巴结转移22例，无淋巴结转移11例。CINⅠ12例，CINⅡ-Ⅲ20例，以16例正常宫颈组织为对照。

1.2 主要试剂与方法

Vimentin、CX43免疫荧光试剂盒与Western Blot均购自武汉博士德生物工程有限公司。方法按照说明书的详细步骤进行。

1.3 结果判定

荧光显微镜下可见细胞浆中出现蓝色荧光者为阳性细胞。每张切片阳性细胞分布区随机选取5个不重复视野，高倍镜（×400）下观察计数每个视野中阳性细胞数，并计算阳性率。imageproplus4.10版本的专业图像分析软件进行图像分析，记录积分光密度。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 Cx43和Vimentin表达与宫颈癌临床病理特征的关系

（1）Cx43在正常宫颈组织、CIN I、Ⅱ-Ⅲ及宫颈癌中的阳性表达率分别为68.8%、66.7%、65%、27.3%。CIN I、CIN Ⅱ-Ⅲ组与正常宫颈组无统计学差异（p>0.05）；宫颈癌组cx43表达明显低于正常宫颈组，差异有统计学意义（p=0.006）；cx43在宫颈癌侵犯静脉组与未侵犯静脉组的阳性表达率分别为13%和60%，组间有显著性差异（p=0.018）；cx43在宫颈癌侵犯淋巴结组与未侵犯淋巴结组的阳性表达率分别为9.1%和63.6%，组间有显著性差异（p=0.004）。

（2）Vimentin在正常宫颈组织、CIN I、Ⅱ-Ⅲ及宫颈癌中的阳性表达率分别为12.5%、25%、50%、69.7%，表达依次增强，对Vimentin在三种组织中的阳性表达率进行X2检验，Vimentin在三种组织中的阳性表达率有显著性差异（p=0.024）；Vimentin在宫颈癌侵犯静脉组与未侵犯静脉组的阳性表达率分别为90.9%和27.3%，组间有显著性差异（p=0.001）；Vimentin在宫颈癌侵犯淋巴结组与未侵犯淋巴结组的阳性表达率分别为86.4%和36.4%，组间有显著性差异（p=0.011）。

（3）CX43和Vimentin表达之间的相关性分析。对Vimentin与cx43在宫颈癌中的表达情况进行spearman相关分析显示：Vimentin与cx43的表达呈负相关（r=-0.485，p=0.004）。

2.2 免疫荧光染色及Western Blot结果显示

结果显示：Cx43在正常宫颈组织、CIN I、CIN Ⅱ-Ⅲ及宫颈癌中的蛋白表达逐渐降低，差异具有统计学意义（p<0.05）；Vimentin在正常宫颈组织、CIN I、CINⅡ-Ⅲ及宫颈癌中的蛋白表达逐渐升高，差异具有统计学意义（p<0.05）。

3 讨论

宫颈癌EMT过程中涉及到的连接蛋白类可能相互矛盾。但对于CX-43而言这好像比较特殊，CX-43在本文中得到广泛的研究。然而当EMT被考虑分为不同阶段时，有些粘附性能够以不同的形式被发现并且明显的矛盾，在侵袭过程中连接蛋白所具有的作用。确实，EMT的第一个阶段可允许侵袭性细胞从最初的肿瘤中进行分离是钙粘着糖蛋白的依赖性细胞-细胞粘附力的丢失和特异性细胞-基质粘附力的建立的结果[2]。在这个阶段有可能出现在E-钙粘着糖蛋白和N-钙粘着糖蛋白之间的这种转换，并且经常伴随着交界性斑块的丢失，这与GJIC的丢失是相互联系的。通过整合素与ECM连接会出现允许CX-43表达的维持，这与或多或少的极化的交界斑相联系。在这一点上，功能性GJIC好像在肿瘤细胞与间质细胞之间建立异型细胞性GJIC。反过来说，激活微环境对于癌症细胞侵袭一个决定性的步骤。这种肿瘤旁间质的激活允许间质蛋白水解酶的分泌和激活，间质蛋白水解酶在ECM内有助于肿瘤细胞侵袭，在这个时间点，当侵袭过程导致肌动蛋白纤维和肿瘤细胞膜结构的重新组成，支架蛋白通过CX43-ct和/或半通道所起到的功能，可能更有助于由ECM降解所介导的侵袭过程。这种猜想可能被在平面迁移过程ECM没有细胞间降解，在一个平面CX-43并没有表现出本质的事实所支持。然而当ECM在侵袭性细胞中转变为固定不动的细胞，CX-43好像能够在转录、翻译或翻译后的水平进行不同的类型的调节，允许它们在质膜（脂筏）的triron不溶性结构的定位[3]。

波形蛋白被报道可以通过由PI3K/AKt和Erk1/2信号通路所介导的EGFR的激活进行上调，这在卵巢癌的细胞迁移和侵袭侵润过程和发展过程中起到了重要的作用[4]。在宫颈癌中，波形蛋白表达水平的上调与EGFR的过度表达相联系，作为宫颈癌细胞侵润的潜在的刺激因素曾经被报道过。据报道，在VIM的启动子区域产生超甲基化可激活宫颈癌细胞的增殖和迁移。波形蛋白在子宫内膜癌细胞中也被报道呈过度表达状态，在子宫内膜癌中癌症相关性或纤维细胞可通过PI3K/AKt和MAPK/ Erk通路诱导子宫内膜癌细胞增殖[5]。

（通讯作者：谢书阳）

[1]Jongen W,Fitzgerald D,Asamoto M,et al.Regulation of connexin 43-mediated gap junctional intercellular communication by Ca2+ in mouse epidermal cells is controlled by E-cadherin[J].Cell Biol,1991,114,545-555.

[2]Meyer R,Laird D,Revel JP.Inhibition of gap junction and adherens junction assembly by connexin and A-CAM antibodies[J]. Cell Biol,1992,119,179-189.

[3]Wang Y,Rose B.An inhibition of gap-junctional communication by cadherins[J].Cell Sci,1997,110,301-309.

[4]Hernandez-Blazquez F,Joazeiro P,Omori Y.Control of intracellular movement of connexines by E-cadherin in murine skin papilloma cells[J].Exp Cell Res,2001,270,235-247.

[5]Nambara C,Kawasaki Y,Yamasaki H.Role of the cytoplasmic loop domainof Cx43 in its intracellular localization and function: possible interaction with cadherin[J].Membr Biol,2007,217,63-69.

李美霞（1981-），女，山东省寿光市人。大学本科学历。现为主治医师。主要研究宫颈癌的治疗与预防。