林达芳/重庆市垫江县畜牧生产站



猪支原体肺炎合并链球菌病的诊断与防治

林达芳/重庆市垫江县畜牧生产站

2015年3～7月，垫江县几个猪场的仔猪及育肥猪出现以咳嗽、呼吸困难、发病率高、死亡率高为特征的猪传染病。笔者对该病进行了流行病学调查、临床诊断、病理剖检、病原分离、生化鉴定和动物实验等确诊为猪支原体肺炎合并链球菌病。现报告如下：

（一）发病情况

三月，A场的125头80 kg左右的猪全部发病，突然不食，体温升高，咳嗽，腹式呼吸，经药物治疗，有一定好转，但始终不能完全恢复，后被迫淘汰，于全群转出后的当晚将整个场地彻底消毒后，又将146头40 kg的猪转入此场，第二天，后进这一批又全群发病，同时，另有56头太湖后备母猪也发病，后经过积极处理，得以控制。其附近一猪场共有86头育肥猪也同样遭此命运。

B场于三月从外县引进20 kg左右仔猪562头，进场后即有部分猪发病，主要症状是喘气、呼吸困难，用药物得以控制，但此病在猪群中都有零星散发，其中死亡23头，在5月5日用水给猪冲水时由于水温只有4℃～7℃，第二天全群发病，共死亡45头。

C场于三月从外县引进仔猪182头，陆续有仔猪发病，死亡26头。

（二）临床症状

精神不振，头下垂，呼吸次数增加，伸颈呼吸，甚者呈犬坐姿势，腹壁起伏明显，不时发出哮喘声，有的口鼻流出淡红色泡沫。体温多在40℃左右。食欲减退、废绝。耳根、腹侧、四肢内侧皮肤出现弥漫性暗红色紫斑。有的猪不能站立，跛行；有的四肢作游泳状。

（三）病理变化

肺水肿，气肿，在肺的心叶、尖叶、中间叶及膈叶的前下部，出现融合性支气管肺炎变化，病变的颜色为淡灰色或灰红色，病变部界限明显，像鲜嫩的肌肉样。肺门淋巴结和纵膈淋巴结显著肿大，呈灰白色，边缘轻度充血。

脾脏肿大、柔软，呈暗红紫色，切面滤泡及脾梁不明显。

全身淋巴结有不同程度的肿大、充血和出血。

切开肿大的关节可见关节囊内有黄色胶冻样液体，关节囊膜面充血、粗糙。

（四）实验室检验

1．取病死猪肝、脾、淋巴结、肾制成触片，干燥、固定、革兰氏染色、镜检，可见革兰氏染色阳性，并呈短链状排列的球菌。无菌采取病料直接划线于血清琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板，同时接种于皮克增菌液做链球菌选择性增菌，37℃培养24 h后，挑取皮克增菌液转接种于绵羊血琼脂平板，挑取各类琼脂平板上的可疑菌落，反复纯化后做生化实验，最终鉴定获得一株细菌，即β溶血性链球菌。选取病料接种于马丁肉汤培养基，经24 h培养，取培养物0．2 ml皮下注射小鼠，实验组小鼠均于48 h以内死亡，对照组全部健活。

2．微量全血－酶联免疫吸附试验（微酶试验）。用消毒针头点刺猪耳背侧静脉，用定量移液管吸取0．1 ml血液，滴于新华滤纸上，自然风干，制成全血纸片送检。将干血纸片按血滴大小剪下，放入试管中，加入被检血样稀释液2．5 ml作1∶25倍稀释。

支原体抗原、酶标记抗体、标准阴、阳性血清均为0．1 ml、冻干包装，由吉林兽医科学研究所提供。

取聚苯乙烯微量反应板每孔加入稀释抗原200 uL（最后一孔不加抗原，为底物对照孔）37℃水浴作用3 h后，置4℃过夜。

次日，用洗滴液冲洗3次，甩干后每孔加被检血样200 uL（最后第2列孔加标准阴性对照血清、标准阳性对照血清200 uL）37℃作用2 h。

甩干血样液，洗涤3次，甩干各孔分别加入已稀释标记抗体200 uL，置37℃水浴作用2 h。

用去酶标记抗体，洗涤3次，甩干，加入底物溶液200 uL，置37℃水浴作用20 min后取出，每孔加50 uL 2 mol/L硫酸液中止反应。

以底物对照孔校正酶标测定仪，在波长490 nm，测光密度值（OD）。

结果判定：以被检血样孔OD值为S，标准阴性对照血清孔OD值为N，S/N比值进行判定。其标准为：

判定标准：

S/N　判定结果　S/N　判定结果＜1.4　-　2.6～3.0　+ + + 1.4～2.0　+　＞3.1　+ + + + 2.1～2.5　+ +

三个猪场共采集血样86份，其结果如下：

结果及份数　-　+　+ +　+ + +　 + + + + 86　4　8　16　21　37

3．采集病猪血清20份，用正向间接血凝试验检测，猪瘟抗体滴度＞4 Log2的有19份，有效免疫抗体合格率为95%。

4．采用北京望尔生物公司生产的高致病性蓝耳病抗体检测ELISA试剂盒检测18份猪血清样品，结果全部为阴性。

经上述诊断，此三批猪为支原体合并链球菌感染。

（五）治疗措施

1．预防和控制本病主要在于坚持预防为主，采取综合性防制措施。坚持自繁自养的原则，确实需引进猪时，引入后应远离生产区隔离饲养3个月，并经检疫证明无疫病，方可混群饲养。发现喘气病阳性的病猪，应立即隔离治疗，治愈后再接种疫苗。

2．给种猪和新生仔猪接种猪喘气病灭活疫苗和链球菌苗，以提高猪群免疫力。

3．每吨饲料中添加80%泰妙菌素50 g和金霉素150 g，或利高霉素(林肯霉素＋壮观霉素)1 000 g，可有效预防和治疗猪喘气病和链球菌病。

4．对已感染喘气病及链球菌病的猪群要精心护理，隔离饲养。对咳嗽严重的猪群，可考虑以湿料分餐饲喂。及时淘汰治疗效果不佳的病猪和僵猪，防止疫病的传播。

5．病猪可使用氟苯尼考、林肯霉素、头孢等肌肉注射，重者可在充分保定的情况下进行胸腔注射、腹腔注射、耳静脉滴注。对呼吸困难者，使用氨茶碱等；对体弱者可采用支持疗法。