张霞菲, 成　锐, 时志路, 金　燕

(陕西师范大学化学化工学院, 陕西省生命分析重点实验室, 陕西 710062)



基于链置换循环无标记检测端粒酶RNA的荧光法

张霞菲, 成锐, 时志路, 金燕

(陕西师范大学化学化工学院, 陕西省生命分析重点实验室, 陕西 710062)

摘要以氧化石墨烯(GO)作为DNA载体和荧光猝灭剂, SYBR Green Ⅰ(SGⅠ)为荧光信号探针, 发夹核酸探针为分子识别探针, 基于目标物启动的发夹核酸探针链置换循环反应, 建立了一种利用荧光共振能量转移和链置换循环放大技术检测端粒酶RNA(hTR)的荧光新方法. 发夹核酸探针hpDNA1和hpDNA2吸附在GO表面, 嵌插在发夹DNA探针茎部的SGⅠ的荧光信号被GO猝灭. 当人工合成的目标物(T1)存在时, T1与hpDNA1杂交打开hpDNA1的茎-环结构而引发hpDNA2与T1之间的链置换循环反应, 由此累积产生大量的hpDNA1/hpDNA2杂交双链. 刚性的双链DNA脱离GO表面, 导致所嵌插的SGⅠ产生较强的荧光信号. 基于荧光信号的变化, 可定量检测0.2～50 nmol/L的T1, 检出限为90 pmol/L. 该方法为端粒酶RNA检测提供了一种高灵敏、高特异性且无需标记的荧光新途径.

关键词端粒酶RNA; 链置换循环; 荧光共振能量转移; 无标记

E-mail: jinyan@snnu.edu.cn

端粒酶(Telomerase)是一种核糖核蛋白酶, 其主要功能是催化端粒(Telomere)末端不断延伸(TTAGGG)n序列, 从而克服细胞分裂过程中的端粒缩短问题. 研究表明, 端粒酶在85%以上的人类肿瘤细胞中被高表达, 而在正常体细胞中的表达量则极低甚至不表达. 因此, 端粒酶与细胞的恶性转化及持续分裂增殖具有密切关系, 是恶性肿瘤发展程度的衡量指标[1～8]. 端粒酶由3个主要成……