罗晨煖， 罗跃华， 陈伟康， 郑东昆， 黄惠明（1.南昌大学药学院，江西南昌330006；.江西省药品检验检测研究院，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西南昌33009）



UHPLC法同时测定六味香连胶囊中5种成分

罗晨煖1，2， 罗跃华1，2， 陈伟康2， 郑东昆1，2， 黄惠明1*
（1.南昌大学药学院，江西南昌330006；2.江西省药品检验检测研究院，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西南昌330029）

摘要：目的 建立超高效液相色谱（UHPLC）法同时测定六味香连胶囊（木香、盐酸小檗碱、枳实等）中柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚的含有量。方法 该药物70%甲醇提取物的分析采用Agi1ent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）；乙腈（A）-0.2%磷酸（B）为流动相，梯度洗脱；体积流量0.7 mL/min；检测波长294 nm；进样体积1 μL；柱温40℃。结果 柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚分别在3.78～189.20 μg/mL（r＝0.999 5）、1.28～64.00 μg/mL（r＝0.999 5）、26.78～1 339.20 μg/mL（r＝0.999 7）、1.48～74.00 μg/mL（r＝0.999 5）、1.33～66.60 μg/mL（r＝0.999 9）范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率（n＝9）分别为98.8%、99.0%、99.6%、98.7、100.1%，ISD分别为1.7%、1.6%、1.4%、2.2%、1.6%。结论 该方法简便快速，重复性好，可用于六味香连胶囊的质量控制。

关键词：六味香连胶囊；柚皮苷；橙皮苷；盐酸小檗碱；和厚朴酚；厚朴酚；UHPLC

The ana1ysis of70% methano1ic extract of this drugwas performed on Agi1ent XDB-C18co1umn（4.6 mm×50 mm，1.8 μm），mobi1e phase was acetonitri1e（A）-0.2% formic acid（B）in a gradient e1ution manner，detection wave1ength was set at294 nm，injection vo1umewas1 μL，and co1umn temperaturewasmaintained at40℃.RESULTS Naringin，hesperidins，berberine hydroch1oride，honokio1 and magno1ia disp1ayed good 1inear re1ationshipswithin the ranges of 3.78 -189.20 μg/mL（r＝0.999 5），1.28 -64.00 μg/mL（r＝0.999 5），26.78 -1 339.20 μg/mL（r＝0.999 7），1.48 -74.00 μg/mL（r＝0.999 5）and 1.33 -66.60 μg/mL（r＝0.999 9），and their average recoveries（n＝9）were 98.8%，99.0%，99.6%，98.7% and 100.1% with the ISDs of1.7%，1.6%，1.4%，2.2% and 1.6%，respective1y.C0NCLUSI0N Thismethod is simp1e，rapid and reproducib1e，which can be app1ied to the qua1ity contro1of Liuwei Xiang1ian Capsu1es.

KEY W 0RDS：Liuwei Xiang1ian Capsu1es；naringin；hesperidins；berberine hydroch1oride；honokio1；magno1ia；UHPLC

六味香连胶囊由木香、盐酸小檗碱、枳实、白芍、姜厚朴、槟榔6味药加工制成，为江西德瑞制药有限公司独家品种，具有祛暑散寒、化滞止痢之功效，临床上用于肠胃食滞、红白痢症、腹痛下坠、小便不利等［1］。该方中，枳实可破气消积、化痰散痞［2］，其活性成分柚皮苷与橙皮苷具有抗炎、镇痛、利尿、抗病毒、抗肿瘤等药理作用［3-6］；盐酸小檗碱为广谱抗菌药，主要用于志贺菌属、链球菌、葡萄球菌、毛癣菌等引起的感染［7-10］；厚朴具有燥湿消痰、下气除满［11］的功效，其主要活性成分和厚朴酚与厚朴酚具有抗菌、抗炎、镇痛、止泻等药理活性［12-14］。在该品种试行标准［1］中，采用紫外分光光度法对盐酸小檗碱进行含有量测定，但专属性不强、效果不佳；采用薄层扫描法测定和厚朴酚与厚朴酚的含有量，但操作繁琐、重复性不理想。为了控制该制剂的质量，本实验建立超高效液相色谱（UHPLC）法，同时快速测定胶囊中上述5种成分的含有量，该方法操作简单，专属性强，分析时间短，可为六味香连胶囊的质量评价提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agi1ent 1290高效液相色谱仪（包括G4220A二元泵、G1316C柱温箱、G4226A全自动进样器、G4212A二极管阵列检测器）、Agi1ent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）（美国Agi1ent公司）；Sartorius BSA124S-CW、BT 25S电子天平（德国Sartorius公司）。

1.2 试药 六味香连胶囊（批号20150101、20150301、20150501）均由江西德瑞制药有限公司提供。柚皮苷（批号110722-200610）、橙皮苷（批号110721-201316，纯度95.3%）、盐酸小檗碱（批号110713-200208）、和厚朴酚（批号110730-200206）、厚朴酚（批号110729-200006）对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯；水为超纯水（Mi11ipore超纯水系统制备）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Agi1ent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）；流动相为乙腈（A）-0.2%磷酸（B），梯度洗脱（0～1.0 min，10.0%A；1.0～7.0 min，10.0%～33% A；7.0～7.1 min，33%～55% A；7.1～12.0 min，55%～65% A；12.0～12.1 min，65%～95% A；12.1～15.0 min，95%A）；体积流量0.7 mL/min；检测波长294 nm；柱温40℃；进样量1 μL。在该条件下，柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚色谱峰与相邻峰的分离度均大于1.5，阴性样品无干扰。色谱图见图1。

图1 HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

2.2 混合对照品溶液的制备 分别称取柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚对照品适量，加70%甲醇稀释成质量浓度分别为378.40、128.00、2678.40、148.00、133.20 μg/mL的混合对照品储备液。精密吸取适量，加70%甲醇制成每1 mL分别含柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚37.84、12.80、267.84、14.80、13.32 μg的混合对照品溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取本品内容物0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50 mL，称定重量，超声（500 W、40 KHz）50 min，放冷，再称定重量，70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液20 mL，置于50 mL量瓶中，70%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 分别按处方比例及制剂工艺制备不含盐酸小檗碱、枳实、厚朴的阴性样品，再按“2.3”下方法制备阴性对照溶液。

2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下混合对照品储备液适量，70%甲醇溶液分别稀释2、5、10、20、40、100倍，混匀，得到系列质量浓度的混合对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定。以对照品溶液的质量浓度（μg/mL）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得到柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚的回归方程及相关系数。结果见表1。

表1 5个成分的线性回归方程和相关系数Tab.1 Linear regression equations and correlation coefficents of five constituents

2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液1 μL，在“2.1”项色谱条件下重复进样6次，记录峰面积。结果，柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚峰面积的ISD分别为0.2%、0.4%、0.3%、0.2%、0.3%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（批号20150301），在“2.1”项色谱条件下，于0、2、4、8、12、24 h分别进样，记录色谱峰面积。结果，柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚峰面积的ISD分别为1.6%、1.1%、1.0%、0.2%、0.2%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.8 重复性试验 精密称取同一批样品（批号20150301），共6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样1 μL，记录峰面积。结果，柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚平均含有量分别为13.55、7.40、116.92、5.40、5.99 mg/g，ISD分别为1.6%、1.9%、1.4%、1.5%、1.2%，表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验 精密称取含有量已知的六味香连胶囊（批号20150301）样品粉末0.25 g，分低、中、高3个水平，共9份。分别精密加入相当于样品中各成分含有量80%、100%、120%的混合对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进样测定，记录峰面积，计算回收率，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果（n＝9）Tab.2 Results of recovery tests（n＝9）

2.10 含有量测定 取六味香连胶囊3批（批号20150101、20150301、20150501），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，每批3份，记录峰面积，计算其中柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚的含有量。结果见表3。

表3 含有量测定结果（n＝3）Tab.3 Results of content determ ination（n＝3）

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3 讨论

3.1 提取条件的选择 本实验考察了不同提取方法（回流、超声）、提取溶剂（70%甲醇、纯甲醇、70%乙醇、纯乙醇、盐酸-70%甲醇［1∶100］、盐酸-纯甲醇［1∶100］），溶剂用量（25、50、100 mL），提取时间（30、40、50、60 min）对提取效率的影响。结果显示，50 mL 70%甲醇超声50 min时，提取效果最佳。

3.2 色谱条件的选择 通过DAD检测器对供试品色谱在400～190 nm波长范围内进行光谱扫描，发现柚皮苷、橙皮苷、盐酸小檗碱、和厚朴酚、厚朴酚分别在283、283、345、294、294 nm波长下有最大吸收峰。比较各波长供试品的色谱图后，综合考虑各待测成分在样品中的含有量，为了使5个成分的响应比较均衡，故选择294 nm作为该方法的检测波长。

3.3 流动相的选择 比较了乙腈-0.2%磷酸、乙腈-0.1%磷酸、乙腈-0.2%甲酸、乙腈-0.1%甲酸、乙腈-0.05 moL/L磷酸二氢钾（磷酸调pH＝3.0）流动相，进行梯度洗脱。结果，以乙腈-0.2%磷酸为流动相时，色谱中各待测成分均能达到很好的分离效果。

参考文献：

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Simultaneous determ ination of five constituents in LiuWei Xianglian Capsules by UHPLC

LUO Chen-xuan1，2， LUO Yue-hua1，2， CHENWei-kang2， ZHENG Dong-kun1，2， HUANG Hui-ming1*

（I.School of Pharmacy，Nanchang University，Nanchang 33OOO6，China；2.Jiangχi Provincial Institute for Drug Inspection and Testing，Jiangχi Provincial Engineering &Technology Research Center for Quality of Drugs and Medical Devices，Nanchang 33OO29，China）

ABSTRACT：AIM To estab1ish an u1tra high performance 1iquid chromatography（UHPLC）method for the simu1taneous determination of naringin，hesperidins，berberine hydroch1oride，honokio1and magno1ia in Liuwei Xiang1ian Capsu1es（Aucklandia lappa，berberine hydroch1oride，Fructus aurantii immaturus，etc.）.M ETH 0 DS

*通信作者：黄惠明（1966—），男，博士，硕士生导师，从事药物设计与合成研究。Te1：13870809536，E-mai1：782897214@qq.com

作者简介：罗晨煖（1990―），女，硕士生，从事药物分析研究。Te1：15270892673，E-mai1：470315848@qq.com

收稿日期：2015-10-27

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.016

中图分类号：I927.2

文献标志码：A

文章编号：1001-1528（2016）03-0556-04