陈云华， 李慧， 张光亚， 葛慧华， 李夏兰

(华侨大学 化工学院， 福建 厦门 361021)



阿魏酸酯酶O42807在毕赤酵母GS115中的表达

陈云华， 李慧， 张光亚， 葛慧华， 李夏兰

(华侨大学 化工学院， 福建 厦门 361021)

摘要：研究阿魏酸酯酶O42807基因(fae)在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达及重组阿魏酸酯酶的酶学特性.化学合成fae基因序列，构建分泌型重组质粒pPIC9K-fae，经线性化后电转化至毕赤酵母GS115，对筛选出的高活性转化子进行诱导表达.SDS-PAGE分析显示：发酵上清液为单一条带，表观相对分子质量为42 ku，酶活为78.49 nkat·mL-1，比活力为524.38 nkat·mg-1，最适反应温度为50 ℃，在40～45 ℃温度范围内较稳定，最适反应pH值为5.0～5.5，且在pH值为6.0时，稳定性较好;金属离子K+，Ca2+，Na+对其活性有促进作用，Fe2+，Zn2+有一定的抑制作用，而Mn2+，Cu2+对其有明显的抑制作用.

关键词：阿魏酸酯酶； 表达； 毕赤酵母； 酶学性质

植物细胞壁中，酚酸类物质(如阿魏酸、咖啡酸、对香豆酸等)通过酯键与多糖(如阿拉伯木聚糖、果糖)的阿拉伯糖基或半乳糖基相连，或者通过醚键与木质素相连，形成致密的网状结构[1].阿魏酸酯酶(feruloyl esterase，FAE，EC 3.1.1.73) 又名肉桂酸酯酶，能水解阿魏酸酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸酯中的酯键，释放出阿魏酸等功能性物质.FAE可以协同木聚糖酶、木质素酶破坏木质纤维的致密网状结构，使细胞壁结构变得疏松，从而促进木质纤维素完全降解[1-2].FAE对木质纤维废弃物利用有着重要意义[3].至今,已经从细菌和真菌中分离得到40多种FAE，但目前报道的FAE的酶活及表达量都达不到工业需要[4-6].毕赤酵母(Pichiapastoris)可高密度地发酵培养，其菌……