螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞抗氧化能力的影响

陈萌，庞辉，王慧杰，陈相宜

(广西医科大学生理教研室，广西 南宁530021)

Effect of spirulina kinase on HUVEC induced by peroxide

CHEN Meng, PANG Hui, WANG Hui-jie, CHEN Xiang-yi

(DeptofPhysiology，GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China)

中国图书分类号：R322.123；R329.24；R345.57；R349.1；R977.3

关键词：螺旋藻激酶;人脐静脉内皮细胞;氧化损伤;丙二醛;超氧化物歧化酶;谷胱甘肽过氧化物酶

Key words:spirulina kinase; human umbilical vein endothelial cells; oxidative damage; MDA;SOD;GSH-PX

内皮细胞损伤是动脉粥样硬化发生的起始步骤，氧化应激则被认为是血管内皮损伤最重要的致病因子之一[1-2]。研制抗氧化内皮细胞保护剂已成为国内外研究的热点。我们前期的研究证明螺旋藻激酶(SPK)具有抗凝溶栓、保护细胞的能力[3]。本研究建立脐静脉内皮细胞氧化损伤模型，探讨螺旋藻激酶的抗氧化能力和保护细胞的作用。

1材料与方法

1.1材料螺旋藻激酶[2](广西北海康福公司)；人脐静脉内皮细胞(HUVEC304，ScienCell，USA)；RPMI 1640培养基和胎牛血清(Gibco,USA)；Trypsin 1 ∶250 胰蛋白酶(Amerco,USA)；维生素E(Sigma，USA)；蛋白质定量、MTT、MDA、SOD和GSH-PX试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2细胞准备复苏冻存的HUVECs，37℃、5% CO2细胞培养箱中培养，待细胞生长到80%，用胰蛋白酶消化传代，选择生长良好的第3~5代用于实验。

1.3实验分组分为对照组、损伤组、阳性组、SPK低、中、高剂量组。对照组不做药物处理，阳性和SPK组加入所需药物(10 mg·L-1VitE、1 g·L-1SPK、2 g·L-1SPK、3 g·L-1SPK)预孵育12 h，随后除对照组外，各组中加入终浓度为2 mmol·L-1的H2O2损伤细胞4 h。

1.4MTT法检测SPK对HUVEC活性的影响用SPK溶液预孵育细胞12 h，冲洗后每孔加入MTT溶液20 μL，37℃培养4 h，吸干孔内液后，加入DMSO 150 μL，用酶标仪于波长490nm处测定各组吸光度(OD值)，各孔OD值=该孔实测 OD490值 -空白孔OD值，OD值大小与细胞活力正相关。

1.5各项实验指标测定各组细胞处理结束后，吸取细胞上清液，超声破裂法获得细胞裂解液，按照试剂盒说明书步骤检测细胞培养液中SOD、GSH-PX含量，及细胞内MDA的含量。

2结果

2.1SPK对HUVEC活力的影响SPK以0.5 g·L-1逐步递增，SPK为0的对照为(0.894±0.094)；从1 g·L-1开始细胞活力明显增加(0.924±0.038)，当浓度为4 g·L-1达最大(0.969±0.092)(P<0.05)。

2.2SPK对MDA含量、SOD和GSH-PX活性的影响对照组MDA含量为(0.44±0.11)μmol·L-1，SOD、GSH-PX活性分别为(34.20±2.41) kU·L-1和(28.19 ± 0.84) kU·L-1。与对照组相比，损伤组MDA含量上升了97.73%，SOD和GSH-PH活性下降了73.95%和62.72%(P<0.05)。与损伤组比较，SPK低剂量组GSH-PX的活性上升了56.52%(P<0.05)；SPK中剂量组MDA含量下降了49.43%，SOD和GSH-PX的活性上升了73.18%和94.39%(P<0.05)；SPK高剂量组MDA含量下降了60.92%，SOD和GSH-PX的活性上升了148.37%和120.36%(P<0.05)，且高剂量组结果与阳性组相似。

3讨论

氧化应激的产生是由于活性氧(ROS)的过度积累，H2O2是最常见的ROS之一。细胞过氧化损伤形成的丙二醛(MDA)可导致细胞膜的通透性发生改变，引起细胞损伤。与此同时，机体自身具有多种防御机制以清除ROS，其中包括SOD和GSH-PX。SOD通过歧化作用清除氧自由基生成H2O2，GSH-PX则在还原型谷胱甘肽的作用下催化H2O2分解成H2O，二者共同维持机体的氧化与抗氧化的平衡[4-5]。实验显示，螺旋藻激酶可降低人脐静脉内皮细胞MDA，提高SOD和 GSH-PX，表明其有抗细胞氧化应激，保护细胞的作用。

(致谢：本实验在实验生理科学中心完成，感谢中心老师和技术员给予的支持与帮助！)

参考文献:

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[2]王锦淳,苏佩清,孙丹丹,俞霞. 黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究[J]. 中国药理学通报, 2012, 28(3):397-402.

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[3]赵杰, 肖云晓,蒋浩,庞辉. 螺旋藻激酶对人脐静脉内皮细胞t-PAmRNA、PAI-1mRNA表达的影响 [J]. 时珍国医国药,2012,23(6):1471-3.

[3]Zhao J,Xiao Y X, Jiang H,Pang H. Effects of spirulina kinase on the expression of t-PAmRNA,PAI-1mRNA in human umbilical vein endothelial cell [J].LishizhenMedMatMedRes,2012,23(6):1471-3.

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文献标志码：A

文章编号：1001-1978(2016)02-0293-02

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.02.028

作者简介：陈萌(1988-), 女，硕士，研究方向：海洋药物应用,Tel：0771- 5358074,E-mail:864927759@qq.com;庞辉(1962-)，女，硕士，教授，研究方向：海洋药物应用，通讯作者，Tel:0771-5358074,E-mail: 454720524@qq.com

基金项目:广西壮族自治区自然科学基金资助项目(No 2013GXNSFAA019176)；广西科技攻关与新产品试制项目(No 0992025-22)

收稿日期:2015-11-17,修回日期:2015-12-26

网络出版时间：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160125.1557.056.html

网络出版地址：2016-1-25 15:57

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