孙井龙 汤征

【摘要】目的：建立反相色谱法测定依替巴肽的氨基酸比值。方法：采用以 6- 氨基喹啉- N- 羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）与各氨基酸柱前定量衍生后，经反相色谱测定。结果：在范围内各氨基酸的线性关系良好，精密度，溶液稳定性，回收率均良好。结论：该方法准确可靠，重现性好，易于操作，可用于依替巴肽中氨基酸组成的测定。

【关键词】AccQ- Tag；依替巴肽；氨基酸比值

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish an HPLC method for determination of Amino acid ratio in eptifibatide . METHODS：the 6-amino decoquinate-N-hydroxyl succinyl imide formicether （ AQC） was taken as the derivative reagent to make for the column quantitative derivatization with each amino acid and then to elute by Reverse phase chromatography.RESULTS：Good linearities were obtained for all amino acids.The method showed high selectivity，good repeatability，accuracy and stability . CONCLUSION：The method is simple and rapid and it is applicable for determination of Amino acid ratio in eptifibatide.

KEY WORDS AccQ- Tag； ptifibatide；Amino acid ratio；

【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2016）01-0015-02

氨基酸比值测定是多肽药物质量控制的重要环节，也是多肽原料药质量标准的重要组成部分，通过测定多肽药物的氨基酸理论个数比，从侧面佐证多肽的结构。因此，对氨基酸比值的分析，可为多肽的结构确证提供理论指导。建立准确可靠的氨基酸比值分析方法是一项有意义的工作。国内外研究和应用于实际样品中氨基酸比值分析的方法主要是色谱方法， 包括离子交换法、 反相高效液相色谱法、 气相色谱法[1]， 按检测方法可分为化学分析法、 电化学方法、 分光光度法等， 按衍生反应的先后， 可分为柱前衍生[2]和柱后衍生法。氨基酸分析仪是柱后衍生反相高效液相色谱法的代表，已有很广泛的应用。在柱前衍生反相高效液相色谱法方面，不同的衍生剂对应不同的方法，是目前研究的主体模式。笔者采用 WATERS 公司的 AccQ- Tag 试剂包[3]作为构建方法的基本条件，通过优化依替巴肽中氨基酸的前处理和色谱条件，以 6- 氨基喹啉- N- 羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂与各氨基酸柱前定量衍生后，再经普通C18柱梯度洗脱， 建立了依替巴肽中氨基酸比值的 AccQ- Tag 测试方法， 应用于实际样品的分析。……