苏 畅，宋 茜，邵鹏柱，黄家乐，鲁 艺，王淑红，王铁杰＊＊

（1.深圳市药品检验研究院 深圳药品质量标准研究重点实验室 深圳 518057；2.香港中文大学中医中药研究所 香港 999077；3.香港中文大学生命科学学院 香港 999077）

《中国药典》中蕲蛇饮片分子鉴定方法的研究和探讨＊

苏 畅1，宋 茜1，邵鹏柱2，3，黄家乐2，鲁 艺1，王淑红1，王铁杰1＊＊

（1.深圳市药品检验研究院 深圳药品质量标准研究重点实验室 深圳 518057；2.香港中文大学中医中药研究所 香港 999077；3.香港中文大学生命科学学院 香港 999077）

目的：运用多种分子鉴定方法，从技术要求和标准编写方面对蕲蛇饮片现行质量标准提出建议。方法：本研究选取蕲蛇所在蝰科Viperidae蝮亚科Crotalinae的7个近缘物种和9种常见的蕲蛇伪品物种作为研究对象，采用DNA条形码技术扩增16S rRNA序列，运用电泳检视法，根据扩增条带的有无评价模板DNA的质量；16S rRNA序列扩增产物通过双向测序，运用BioEdit软件拼接，双端对齐后剪切比对，利用MEGA 5.1软件构建邻接（NJ）系统发育树；采用蕲蛇饮片现行标准方法进行同步鉴别。结果：16S rRNA序列的电泳检视结果可有效评价蕲蛇样品的模板DNA质量，避免由于模板DNA质量不佳导致的假阴性结果的可能性；基于16S rRNA条形码序列建立的NJ树可以鉴别蕲蛇饮片及其混淆品；蕲蛇饮片现行标准方法专属性良好。结论：DNA条形码方法、现行标准方法以及NJ树三者相互结合，从不同角度对蕲蛇饮片进行真伪鉴别，有效弥补蕲蛇饮片现行标准方法的不足，为其他中药品种的分子鉴定技术的质量标准制定提供了参考。……