牛妊娠检测的两种实验室诊断法

田成武

(黑龙江省鸡东县东海镇畜牧兽医站 158212)

本文介绍母牛妊娠检查的两种实验室诊断法，即血浆及乳汁孕酮浓度检测法和乳汁硫酸雌酮检测法。

1血浆及乳汁孕酮浓度的测定

此为一种通过检测牛血浆孕酮浓度进行妊娠诊断的方法。由于妊娠后黄体会持续存在，因此在前一次发情后约21 d采集血样，孕酮应该维持高水平；如果没有妊娠而已接近或正在发情，则此时孕酮水平很低。这种方法是一种十分有效可信的实验室妊娠诊断方法，但也有其缺点，就是需要采集牛血样。

研究表明，孕酮可穿过乳腺而出现于乳汁。实验证实，乳汁孕酮浓度会随血液或血浆孕酮浓度而变化，而且孕酮易溶于乳脂，因此乳汁单位容积中孕酮浓度比血液或血浆中更高。国外学者曾介绍了采用这种技术进行诊断妊娠的方法，此后许多国家开展了大量类似的工作。采用这种方法时，可由饲养员采集约20 mL乳汁于玻璃瓶或塑料瓶中，通常在下午挤奶时采样，因为此时乳汁脂肪含量更高。采集乳样后加入重铬酸钾或氯化汞作为保护剂，如果样品没有暴露在高温或过度紫外线光照中，则孕酮活性几乎没有丧失。

最初采用放射免疫分析技术测定牛奶孕酮浓度，虽然这种方法检测十分有效，但需要使用放射性同位素及专门设备来测定放射性，因此只能在专门的实验室进行，而且其最大的缺点是获得结果需要数天的时间。目前已建立了许多检测法并用于牧场奶牛妊娠的检查，可在采样后1h内获得结果。所用试剂和设备以试剂盒的形式提供。此外还建立了一些半定量或全定量检测法，但只是用于兽医实验室，需要一些设备和专业知识。这两种检测都是以酶联免疫技术(ELISA)为基础的。

基于实验室的定量检测根据孕酮检测构建标准曲线。一般建议每份样品进行2次分析，至少在操作者熟练之前应该如此。在牧场采用这些方法存在一些问题，这些问题概述如下：(1)不熟悉实验室操作过程的人员经常不能很好理解和操作；(2)即使简单设备也需要有相当熟练的操作；(3)需严格遵守操作说明，特别是孵育时间和试剂量；(4)试剂盒应该保存在4℃冰箱中，在使用前预热到室温，但不能加热；(5)有些人难以识别颜色差异；(6)奶样在分析前应保存在2～8℃，必须使用防腐剂。

采集乳样的最佳时间是配种或人工授精后24 d，虽然这一时间间隔能防止在比平均发情间隔长的牛造成假阳性结果，但比平均发情间隔短的牛会造成假阳性结果。采用这种方法进行妊娠诊断时其准确率在80%～88%，诊断未孕的准确率几乎为100%。据报道，现场试验中在输精当天和其后第21天采取乳样，放射免疫分析和酶免疫分析的灵敏度分别为86%和93%，而特异性只有48%(放射免疫分析)和39%(酶免疫分析)。

出现假阴性结果的原因分析：(1)在牧场或实验室识别动物失误。(2)乳样贮存中出现过热或紫外线照射。(3)黄体产生的孕酮少。(4)乳汁混合不充分，样品中乳脂含量低。

出现假阳性结果的原因：(1)发情间隔时间比平均发情间隔短，如18 d，在配种或人工授精后24 d采样时如果未孕，则牛已进入下一周期的黄体期早期。(2)采集乳样后发生了胚胎死亡。(3)能产生孕酮的黄体囊肿。(4)输精时间错误。已有研究表明(Hoffmann等，1976)，高达15%的牛是在非发情期进行了人工授精，如果在此后的24 d采集乳样，并且未观察到发情，采样时牛则处在具有黄体功能的间情期，此时乳中孕酮浓度高。(5)黄体寿命病理性延长。

乳样孕酮检查法的主要优点是可在其他方法(如直肠触诊)之前鉴别未孕牛。如果配种后牛未妊娠，测定第24天乳样可以预测牛在配种后第42天返情；如果牛患有疾病，则可在再次返情之前进行检查治疗。在第24天检查发现的妊娠牛应在随后用直肠超声或触诊检查确诊。牧场进行的现场检测可早至配种后第19天进行，此时如果孕酮浓度低则说明动物未孕，据此可预测第1次返情的时间。最近有研究表明，奶牛和肉牛人工授精后18~24 d或胚胎移植后11~17 d采集粪便样品可以代替血浆或乳汁测定孕酮进行妊娠诊断。

2乳汁硫酸雌酮检测法

硫酸雌酮从数量上来说是妊娠泌乳奶牛乳中主要的雌激素之一。妊娠期硫酸雌酮浓度逐渐增加，妊娠105 d以后出现在所有妊娠动物的乳汁中，而在未孕动物其浓度很低或检测不到，因此检测妊娠105 d之后牛奶硫酸雌酮是可靠的妊娠诊断方法。而且与孕酮分析不同，检测硫酸雌酮不要求准确的采样日期。但是其主要缺点是获得阳性诊断的时间太晚(妊娠105 d后)，因此限制了其应用。但对牧场奶牛繁育工作者来说是应该了解的一种检测方法。

作者简介：田成武(1963-)，男，黑龙江依兰县人，大专，高级畜牧师。

收稿日期：2015-09-21

中图分类号：S823.3

文献标识码：B

文章编号：1005-2739(2016)01-0040-02