赵尔军，金　刚（.甘肃省肃北县畜牧兽医局，甘肃 肃北 736300；.甘肃省肃北县盐池湾乡畜牧兽医站，甘肃 肃北 736300）

黄牛精液冷冻技术探讨

赵尔军1，金刚2
（1.甘肃省肃北县畜牧兽医局，甘肃 肃北 736300；2.甘肃省肃北县盐池湾乡畜牧兽医站，甘肃 肃北 736300）

甘肃省黄牛地方品种优良，黄牛养殖业已经成为农业经济的主要来源。为了促进养牛业的发展，人工授精技术已经普遍推广，尤其是冷冻精液的保存技术的成功研制及推广，对养牛业有非常重要的意义。本文详细阐述了牛精液的冷冻技术，和同行们共同探讨，共同提高。

冷冻精液；意义；原理；保护剂；冷冻技术

甘肃省黄牛地方品种优良，发展前景看好，养牛业发展迅速。为了促进黄牛养殖的发展，黄牛的人工授精技术早在20世纪70年代左右逐渐普及推广，尤其是精液冷冻技术的成功研制，使得精液能够长期保存，对促进甘肃省养牛业的发展起了很大的作用。

1　黄牛冷冻精液的意义

用黄牛冷冻精液进行品种改良，可以最大限度的发挥种公牛的种用价值，冷冻精液可以长期保存，这样1头良种公牛的精液就可以用于1万头以上的母牛配种；缩短品种改良的时间；冷冻精液不受时间、地域的限制，可以大范围的利用良种种公牛，同时种公牛的饲养数量可以减少，饲养成本降低了。

2　精液冷冻保存的原理

精液的冷冻就是就是将精液经过特殊处理，能够达到长期保存的目的。生产中常用液氮（-196℃）、干冰（-79℃）为冷源，在超低温下保存经过处理的精液，此时精子的生理代谢活动受到抑制，升温后精子的活力又可以恢复，这样就达到了长期保存利用的目的。

3　精液冷冻保护剂

生产中最常用的冷冻精液保护剂就是甘油，甘油可以保护精子，提高精子的存活力和活动力，但是也会对精子有一定的损伤，新型的保护剂的开发一直是研究的重要课题。冷冻稀释液是精子的载体，要为精子提供代谢物质，调节精子的受精能力，其成份对精子有很大的影响。例如，牛冷冻精液稀释液中添加VB12可以显著提高精子活力、顶体完整率和质膜完整率；添加某些氨基酸如添加半胱氨酸和谷胱甘肽可以降低在冷冻过程对精子的DNA产生损害。

4　冷冻保存技术

4.1采精及精液品质检查精液的品质直接关系着精液冷冻效果，做好采精的准备工作并规范采精操作技术，才可以获得高质量的精液。采集精液以后，要对精液的品质进行鉴定，不合格的产品要废弃。牛精液的精子活率要不低于0.7，并保存在30℃的水浴中。

4.2精液稀释选择合适的稀释液，按照科学的稀释方法，规范操作程序来对精液进行稀释。稀释以后取样，在38～40℃的条件下进行镜检，稀释后的精液活率要不低于原精液的活率。

4.3降温和平衡降温就是在精液稀释以后，用12～16层的纱布包裹，放到0～5℃的冰箱内经过1～2h的时间将精液缓慢降温的过程。平衡就是将降温后的精液放在冰壶内，放入0～5℃的冰箱内平衡2～4h，以便精液的保护剂充分的进入精子的内部，发挥保护精子的质量的作用。在操作过程中要注意降温、平衡过程中要避光操作，已经降温、平衡后的精液温度不能在回升了。

4.4精液的分装目前常用的分装设备为细管精液分装一体机，这是一套灌装、封口、喷墨印字的一条龙式作业的一体化设备，这种设备的自动化程度高，可以确保精液不被外界污染。如果单独使用细管分装机操作，要在分装前做好细管上的标记，如种公牛的详细信息，自己要清楚，信息要准确、全面。

4.5冷冻（1）冷冻温度冷冻温度是影响牛精液品质的关键因素，精液冷冻刚开始的温度一般为－120～－140℃之间，尽量在8min内达到和维持这个温度区域后，继续降温倒入液氮。生产中由于冷冻精液的数量不同，有时温度稍有回升，同时由于采精的季节、稀释液的成分、甘油的浓度、冷冻剂型的不同，降温的速度和时间也会稍有差异。

（2）冷冻方法目前我国对牛精液的冷冻方法根据设备的不同可以分为两种：精液自动冷冻仪法和简易细管精液冷冻箱法。精液自动冷冻仪法是一种科技含量比较高的方法，冷冻仪是由计算机控制的全自动冷冻容器，人工做好各种准备工作，设定好参数，启动程序，有计算机控制来完成精液的冷冻过程。简易细管精液冷冻箱法是生产中常用的方法，投资少，操作简单。首先要有一个隔热性能较好的、深度在50cm以上的冷冻箱，使用前先加入液氮制冷，根据冷冻细管精液量的多少确定液氮的使用量。然后把冷冻细管精液放在冷冻架上，迅速放入冷冻箱中进行冷冻，整个的冷冻过程一般为8min以内。

4.6牛冷冻精液保存牛的冷冻精液保存在液氮罐中，液氮罐要放在干燥、通风的室内，底部要垫上木板或者毛毡，以防潮湿。储存精液后，要熟知罐的空重和液氮的多少，及时测量，及时补充，尽量减少开罐的次数，开罐后及时盖好。取放精液的时候，速度要快，不要把盛冻精的提桶提到罐口之外，只能到颈基部，开罐时间控制在5s以内为好。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.056