沈友林，汪铭书 *，程安春，贾仁勇，朱德康，陈　舜，刘马峰，刘　菲，杨　乔，孙昆峰，陈孝跃

(1.四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心，成都 611130；2.四川农业大学预防兽医研究所，成都 611130；3.动物疫病与人类健康四川省重点实验室，成都 611130)



1型鸭甲肝病毒VP3蛋白的抗血清中和活性分析及B细胞表位鉴定

沈友林1，2，3，汪铭书1，2，3 *，程安春1，2，3，贾仁勇1，2，3，朱德康1，3，陈舜1，2，3，刘马峰1，2，3，刘菲3，杨乔1，2，3，孙昆峰1，2，3，陈孝跃1，3

(1.四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心，成都 611130；2.四川农业大学预防兽医研究所，成都 611130；3.动物疫病与人类健康四川省重点实验室，成都 611130)

摘要：旨在探究1型鸭甲肝病毒(DHAV-1)VP3蛋白抗血清的中和活性并鉴定VP3的线性B细胞表位。利用pGEX-4T-1表达载体，在BL21(DE3)宿主菌中原核表达DHAV-1VP3基因，以切胶纯化出的蛋白质为抗原免疫兔制备多克隆抗体，通过鸡胚中和试验对多抗的中和效价进行检测；采用Karplus&Schulz、Emini、Jameson-Wolf和Parker方法分别对柔韧性、表面可及性、抗原性及亲水性进行分析，得到了4条候选线性B细胞表位，以制备的兔抗VP3多克隆抗体为一抗，通过间接ELISA方法对人工合成的B细胞表位进行鉴定，并进一步用临床鸭血清样品对鉴定的B细胞表位的抗体检测能力进行评估。结果显示，VP3在BL21(DE3)中以包涵体形式表达，大小约54 ku，Western blot分析表明重组蛋白质具有较好的反应原性。制备的兔抗VP3多克隆抗体的琼扩效价达到1∶16，并能中和DHAV-1，中和效价为1∶39；利用间接ELISA鉴定出GKRKPCRRPIHKPKNPPQEP(1—20 aa)、FNTGRYQMSWYPIADGEQSL(131—150 aa)和VNSSAPSNID(200—209 aa)为VP3的B细胞表位，抗体检测能力试验结果显示表位肽可检测临床DHAV-1鸭血清。本研究表明DHAV-1 VP3的抗血清具备一定的中和活性，1—20 aa、131—150 aa和200 —209 aa为VP3的B细胞表位且具有临床应用前景。……