李一经，李佳璇，武啸，臧明鑫，谢双羽，姜艳平，崔文，唐丽杰

（东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030）

25型蓝舌病病毒VP2蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

李一经，李佳璇，武啸，臧明鑫，谢双羽，姜艳平，崔文，唐丽杰

（东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030）

蓝舌病（Bluetongue，BT）为蓝舌病毒（Bluetongue virus，BTV）引起，以高热、白细胞减少、黏膜溃疡性炎症等为主要症状的反刍动物传染病。试验将25型BTV VP2蛋白分段基因分别克隆至pMAL-c5x载体，以终浓度1.0 mmol·L-1IPTG为诱导剂，在大肠杆菌中分别诱导表达带麦芽糖结合蛋白（MBP）标签的融合蛋白MBPVP2-A、MBPVP2-B、MBPVP2-C。分别以带His标签的重组VP2分段蛋白VP2-A、VP2-B、VP2-C为免疫原，以试验表达VP2分段蛋白MBPVP2-A、MBPVP2-B、MBPVP2-C为抗原筛选杂交瘤细胞。通过细胞融合筛选出6株稳定分泌单克隆抗体的交杂细瘤胞，其中4株McAb亚型鉴定为IgG；2株McAb亚型鉴定为IgM。试验为建立25型BTV血清学鉴别诊断方法奠定基础。

蓝舌病病毒；VP2；原核表达；单克隆抗体

蓝舌病（Bluetongue，BT）由蓝舌病病毒（Bluetongue virus，BTV）引起，属非接触性传染病，主要感染绵羊和牛等反刍动物，主要症状为高热、白细胞减少、黏膜溃疡性炎症等[1-2]。BTV最早发现于1876年，呈世界性分布。目前已从非洲、欧洲、亚洲、北美、南美和大洋洲国家分离到BTV，分布范围扩大，危害严重。反刍动物感染BTV后平均死亡率为35%，其中易感绵羊死亡率高达80%。世界动物卫生组织将BT规定为需上报疾病，在我国为一类动物疾病。

BTV为呼肠病毒科（Reoviridae）、环状病毒属（Orbivirus）、蓝舌病病毒亚群，是典型环状病毒属病毒。BTV粒子为圆形、无囊膜的二十面立体对称结构，核衣壳直径为53～60 nm，其衣壳外存在一层细绒毛状外层，使总直径提高到70～80 nm。……