蒋泽平，张　敏

(江苏省林业科学研究院，江苏　南京　211153)

金焰彩栾试管微型嫁接技术研究

蒋泽平，张敏

(江苏省林业科学研究院，江苏南京211153)

摘要：以金焰彩栾试管苗为接穗，黄山栾树试管苗为砧木，对影响微嫁接苗成活的因子进行了研究。试验以黄山栾树优良单株具腋芽茎段为外植体，灭菌后接种在1/2 MS+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA 培养基上培养30 d的无菌芽苗为砧木，以金焰彩栾播种苗带侧芽的茎段为外植体、灭菌后接种在改良1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖的培养基中培养30 d的无菌芽苗为接穗，使用劈接法，嫁接后在含有不同基本培养基和不同种类、质量浓度的生长调节剂的培养基上培养。结果表明：以培养30 d带2叶的金焰彩栾试管芽苗为接穗，培养30 d带2叶的黄山栾树试管芽苗为砧木，嫁接后以改良培养基1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖进行培养，微型嫁接苗成活率最高，萌发生长效果最好。

关键词：金焰彩栾；组织培养；微繁殖；微嫁接；砧木；接穗

文章编号：1001-7380(2015)05-0017-03

收稿日期：2015-05-25；修回日期：2015-09-12

基金项目：江苏省农业科技支撑计划项目“彩叶栾树新品种选育”(BE2013450)

作者简介：蒋泽平(1963-)，男，江苏丹阳人，研究员，主要从事林木花卉良种选育和植物组织培养技术研究。

中图分类号：Q949.755.5；Q943.1

文献标志码：A

doi:10.3969/j.issn.1001-7380.2015.05.005

试管嫁接又称微嫁接，是一种在试管内将砧木与接穗进行嫁接的技术，它是植物组织培养与嫁接技术的结合。这种嫁接技术是以组织培养为基础，嫁接植物在人工控制的环境条件下培养，排除了外界环境因素对嫁接成活的影响[1-5]。

金焰彩栾(Koelreuteriabipinnatavar integrifoliola ‘Jinyan’)是在黄山栾树实生苗中选出的优良品种，其主要特性是树干或枝条呈黄色，春季新芽、叶呈桔红色，夏季叶呈黄绿色，秋叶呈金黄色，具有很高的园艺观赏价值。该植物主要采用嫁接方法进行繁殖，但是繁殖速度偏低；笔者对该新品种进行了组织培养技术研究并取得成功[6]，但在组织培养技术研究中发现，经过一定代数(5～8代)的继代培养后，试管芽苗叶片会发生离层脱落，严重影响继代繁殖。为此，在前述研究的基础上，笔者以金焰彩栾为接穗，黄山栾树为砧木进行试管嫁接技术研究，试图突破这一技术瓶颈，为加快繁育速度，满足园林绿化市场需求提供技术支撑。

1材料与方法

1.1　试验材料

接穗和砧木分别为金焰彩栾、黄山栾树优良单株无菌试管芽苗。

1.2　试验方法

试验以黄山栾树优良单株具腋芽茎段为外植体，灭菌后接种在1/2 MS+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA 培养基上培养的无菌芽苗为砧木，以金焰彩栾播种苗带侧芽的茎段为外植体，灭菌后接种在改良1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖的培养基中培养的无菌芽苗为接穗。

嫁接用砧木试验：分别带1，2，3，4片叶，以不带叶的为对照，其中带2片叶的砧木培养时间分别为15，30，45 d，以培养30 d带2片叶的金焰彩栾试管芽苗为接穗；

嫁接用接穗试验：分别带1，2，3叶片及茎尖，以不带叶的为对照，其中带2片叶的接穗培养时间分别为15，30，45 d，以培养30 d带2片叶的黄山栾树试管芽苗为砧木。

嫁接方式采用劈接进行。嫁接后接种到改良1/2 MS+ 0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖的培养基中进行培养。培养条件为：光照度为2 500 lx，温度条件为25～27 ℃ ，光照时间12 h/d。接种10瓶，每瓶培养5株。20 d后统计成活率和嫩芽的萌发率，研究不同砧木、不同接穗对试管嫁接效果的影响。

以改良1/2 MS，MS，WPM外加0.02 mg/L BA为基本培养基，附加一定质量浓度的NAA，IBA，IAA等，以培养30 d带2叶的金焰彩栾试管芽苗为接穗，培养30 d带2叶的黄山栾树试管芽苗为砧木，培养条件同上。嫁接20 d后，观察嫁接苗接穗的萌发率和长势以及嫁接部位的愈合程度，研究不同培养基和生长调节物质对试管嫁接效果的影响。

成活率(%)=(成活数/嫁接数)×100；

萌发率(%)=(萌芽数/嫁接数)×100。

2结果与分析

2.1　不同砧木对试管嫁接效果的影响

结果表明，7种不同类型砧木在嫁接后其成活率有差异，不带叶的成活率只有40%，其余类型的嫁接成活率均在60%以上，其中成活率最高的是培养30 d带2叶的砧木达88%；不同类型砧木萌发率差异也很明显，不带叶的成活率只有32%，带1叶的54%，带4叶的56%，其余类型的嫁接成活率均在60%以上，其中成活率最高的是培养30 d带2叶的砧木达88%；从生长状况来看，同样也以培养30 d带2叶的砧木作砧木嫁接的生长最好，嫁接10 d后砧木开始产生不定根，20 d后芽开始萌发并长势旺盛，其他砧木生根较慢，砧木和接穗愈合慢且生长缓慢，接穗后期逐渐褐化(见表1)。因此，选择培养30 d带2叶的黄山栾树无菌芽苗是试管嫁接最合适的砧木。

表1　不同砧木对试管嫁接效果的影响

2.2　不同接穗对试管嫁接效果的影响

由结果(见表2)可以看出，7种接穗在嫁接后20 d进行统计，其成活率差异大。以不带叶接穗的成活率最低，只有40% ，接穗萌发率也低，只有32%；培养30 d带2叶的接穗成活率最高达88%，萌发率也最高达88%；嫁接成活率由高到低的接穗分别为培养30 d带2叶>培养15 d带2叶>茎尖>培养45 d带2叶>带1叶>带3叶>不带叶CK，相应的萌发率的高低排序与成活率一样。

因此，选择带2叶培养30 d的金焰彩栾无菌芽苗做接穗是试管嫁接最合适的接穗。

表2　不同接穗对试管嫁接效果的影响

2.3　不同培养基和生长调节剂对试管嫁接效果的影响

从结果(见表3)可见，在培养30 d带2叶的黄山栾树试管芽苗做砧木，培养30 d带2叶的金焰彩栾试管芽苗做接穗嫁接后在不同的培养基上培养试验，不同的基本培养基中添加不同质量浓度的生长调节剂和蔗糖的9种组合，对试管嫁接效果影响不同。处理6,5,4效果最好，萌发率分别达到88%，85%，82% ，嫁接14 d后砧木开始生根，接穗萌发，生长较好。认为改良1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.02 mg/L IBA +0.05 mg/L IAA +30 g/L蔗糖为最合适的嫁接培养基。

表3不同基本培养基、生长调节剂、蔗糖对试管嫁接效果的影响

处理基本培养基NAA/(mg/L)IBA/(mg/L)IAA/(mg/L)蔗糖/(g/L)萌发率/%1MS0.010.020.0320722MS0.030.040.0530783MS0.050.060.0840754改良1/2MS0.010.040.0840825改良1/2MS0.030.060.0320856改良1/2MS0.050.020.0530887WPM0.010.060.0530808WPM0.030.020.0840789WPM0.050.040.032070

3结论与讨论

在金焰彩栾试管嫁接过程中，接穗的选择是影响嫁接成功与否的关键因素之一。以培养30 d带2叶的试管芽苗为接穗效果最好，其原因可能是，外植体经组织培养后萌发的新芽，具有一定的木质化，容易成活；接穗大小与砧木大小一致，嫁接后砧木和接穗更加容易愈合；培养30 d带2叶的金焰彩栾试管芽苗接穗带叶，嫁接后能进行光合作用制造营养，提高了成活率[7-8]。砧木的选择，同样也是影响试管嫁接成活率的关键因素之一[9-10]，砧木宜选择培养30 d带2叶的黄山栾树试管芽苗做砧木，嫁接后置于生根培养基中培养，这样有利于接穗与砧木的愈合以及营养的供应，提高成活率和萌发效果。

参考文献：

[1]Jonard R，Hugard J， MaChix J ，et a1．In vitro micro-grafting and its applications to fruit science[J]．Scientia Horticulturae，1983，20(1)：147-159．

[2]Estrada-Luna A A，López-Peralta C，Cárdenas-Soriano E．In vitro micrografting and the histology of graft union formation of selected species of prickly pear cactus(Opuntiaspp)[J]．Scientia Horticulturae，2002，92(3/4)：317-327．

[3]陈如珠，李耿光，张兰英．柑桔三倍体的试管嫁接及微繁殖的研究[J].中国柑桔，1992，21(4):10-12.

[4]周艳，周洪英，朱立，等．植物微嫁接研究进展[J].贵州科学,2013,31(2):194-199.

[5]张金林，王锁民，许瑞，等．植物微嫁接技术的研究及应用[J].植物生理学通讯, 2005, 41(2):247-252.

[6]蒋泽平，张敏．金焰彩栾组织培养技术研究[J]．江苏林业科技，2015，42(3)：40-42.

[7]曾斌，李疆，张孝霖，等．库尔勒香梨试管微体嫁接技术的研究[J]. 新疆农业科学, 2006,43(1):47-49.

[8]董丽芬，邹朋波，贾彩霞，等．核桃微体嫁接方法研究[J].西北林学院学报,2007, 22(2):79-81.

[9]成密红，成鸿飞．果树微型嫁接技术研究进展[J].陕西林业科技, 2005(2): 49-51,63.

[10]董高峰，黄涛，李耿光，等．外源激素对沙田柚茎尖微嫁接成活率的影响[J].生态科学, 2001,20(3):26-30.