张兴利　吴鹏飞　邱宏春　孔荣

ITP患者激素治疗前后血清IL-18、CXCL10表达水平的变化及意义探讨

张兴利吴鹏飞邱宏春孔荣

【摘要】目的 研究原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，ITP）患者血清中白细胞介素-18（Interleukin-18，IL-18）、CXC趋化因子配体10（CXC chemo-kine ligand-10，CXCL10）的表达水平，探讨其在ITP发病中的临床意义。方法 采用酶联免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）定量检测45例ITP患者、20例健康者（正常对照组）血清IL-18、CXCL10的水平。结果 激素治疗前ITP患者血清IL-18、CXCL10的表达水平均高于正常对照组（t=5.126，6.576，P＜0.05），治疗后两者与治疗前比较均有统计学差异（t=10.616，7.399，P＜0.05）。激素治疗有效组IL-18、CXCL10的表达水平与正常对照组比较无统计学差异（q = 0.521，0.871，P＞0.05），而无效组IL-18的表达水平仍高于有效组和正常对照组（q=6.137，5.867，P＜0.05）；无效组CXCL10的表达水平同样高于有效组和正常对照组（q=8.933，7.642，P ＜ 0.05）。初发未治疗ITP患者血清IL-18、CXCL10表达呈正相关性（r=0.539，P＜0.05）。结论 ITP患者不同时期血清中IL-18、CXCL10的表达水平不同，且两者具有显著相关性，提示其可能在ITP的发病及治疗过程中发挥一定的作用，联合检测有望在ITP的病情监测、预后判断等方面提供依据。

【关键词】原发免疫性血小板减少症；白细胞介素18；CXC趋化因子配体10

作者单位：215300 江苏省昆山市第三人民医院血液肿瘤科

Changes and Significance of Serum IL-18 and CXCL10 Levels in Patients With ITP Before and After Hormone Therapy

ZHANG Xingli WU Pengfei QIU Hongchun KONG Rong, Department of Hematology and Oncology, the Third People's Hospital of Kunshan, Kunshan 215300, China

[Abstract]Objective To study the expression of Interleukin-18(IL-18)and CXC chemo-kine ligand-10(CXCL10)in primary immune thrombocytopenia(ITP)and clarify their clinical significance. Methods Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect the expression of IL-18 and CXCL10 in serum samples from 45 ITP patients, 20 volunteers(normal control group)served as controls. Results The expression levels of IL-18 and CXCL10 in ITP untreated group were significantly higher than normal control group(t=5.126, 6.576, P<0.05). Both IL-18 and CXCL10 of post-treatment group were significantly different with untreated group(t=10.616, 7.399, P<0.05). Additionally, the levels of IL-18 and CXCL10 in effective-treatment group were not significantly different with normal control(q=0.521, 0.871, P>0.05). However, the levels of IL-18 in ineffective-treatment group were still significantly higher than effective-treatment group and normal control group(q=6.137, 5.867, P<0.05). The levels of CXCL10 in ineffective-treatment group were also significantly higher than effective-treatment group and normal control group(q=8.933, 7.642, P<0.05). There was positive correlation between serum expression levels of IL-18 and CXCL10 in ITP untreated group(r=0.539, P<0.05). Conclusion Different expressions of serum IL-18 and CXCL10 were found in ITP patients, which reflected they may play an important role in pathogenesis and therapy of ITP. United detection of serum IL-18 and CXCL10 may be used as reference indexes of ITP’ clinical stages and prognosis.

[Key words]Primary immune thrombocytopenia, Interleukin-18, CXC chemo-kine ligand-10

原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，ITP）是一种获得性自身免疫性出血性疾病。研究表明，Th1/Th2细胞的平衡在自身免疫病的发生发展过程中起重要作用，其平衡失调与ITP的发生发展有关[1]。目前，在多种疾病中发挥重要作用的IL-18、CXCL10在ITP患者血清中的表达水平方面的研究还很少。为此，我们检测了45例ITP患者的血清IL-18、CXCL10在激素治疗前后表达水平的变化，现报道如下。

1　资料和方法

1.1 一般资料

45例ITP患者均为江苏省昆山市第三人民医院血液肿瘤科2012年1月～2014年6月新诊断的ITP患者，根据《成人原发免疫性血小板减少症诊断与治疗中国专家共识（2011年版）》的诊断标准确诊。其中男性11例，女性34例，年龄12～91岁，平均年龄（46.78±19.49）岁。选取20例健康体检者，近期均无局部及全身感染性疾病，均排除肝、心、肾、肺及其他恶性疾病，也无其他慢性疾病史。本研究通过昆山市第三人民医院伦理委员会批准并经入组者知情同意。

1.2标本采集

抽取正常对照组和实验组（激素治疗前及治疗至血小板正常后）清晨静息状态下空腹静脉血3～5 ml，标本静置2 h后，3 000 r/min离心15 min，分离血清，于-80℃冻存待测，避免反复冻溶。

1.3主要试剂及仪器

IL-18 ELISA试剂盒、CXCL10 Elisa试剂盒均购自上海蓝基生物公司。酶标仪器：型号：MK3，Thermo公司。-80℃超低温冰箱：中国海尔有限公司。

1.4治疗方法

对所有入组患者均采用地塞米松静滴[剂量按泼尼松1 mg/（Kg·d），以泼尼松：地塞米松=5 mg：0.75 mg换算]，至血小板达正常水平后改泼尼松口服。结果：45例ITP患者在运用激素治疗后有40例患者血小板水平在一周内升至正常（平均6.18天），有5例患者在运用激素治疗两周后血小板仍＜30×109/L或者血小板计数增加不到基础值的两倍，视为治疗无效。

1.5检测方法

采用ELISA检测每份血清中待测因子的水平，检测步骤严格按照说明书进行。

1.6统计学处理

采用SPSS13.0软件包分析，所有数据处理前行正态性检验。计量资料符合正态分布，采用（均数±标准差）（x-±s）表示，治疗前后组均数比较采用配对t检验，多组间均数比较采用单因素方差分析进行组间两两比较，行SNK法q检验。两变量关联性

分析采用线性相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1ITP患者激素治疗前、后血清IL-18、CXCL10表达水平

ITP患者激素治疗前血清IL-18、CXCL10水平均高于正常对照组（t=5.126，6.576，P＜0.05）；治疗后血清IL-18、CXCL10水平与治疗前比较均有统计学差异（t=10.616，7.399，P＜0.05），见表1。

表1　各组血清IL-18、CXCL10表达水平（x-±s）

2.2ITP患者激素治疗后不同疗效组血清IL-18、CXCL10表达水平

激素治疗有效组患者的血清IL-18水平与正常对照组比较无显著性差异（q=0.521，P＞0.05）；无效组患者的血清IL-18水平高于正常对照组和有效组（q=6.137，5.867，P＜0.05）。激素治疗有效组患者的血清CXCL10水平与正常对照组比较无显著性差异（q=0.871，P＞0.05）；无效组患者的血清CXCL10水平高于正常对照组和有效组（q=8.933，7.642，P＜0.05）。见表2。

表2　ITP患者激素治疗后不同疗效组血清IL-18、CXCL10表达水平（x-±s）

2.3初发未治疗ITP患者血清IL-18、CXCL10的相关性

运用SPSS13.0软件包对45例初发未治疗ITP患者的血清IL-18、CXCL10值绘制散点图（图1），结果显示IL-18、CXCL10值之间具有线性相关趋势。进一步做线性回归与相关分析，结果显示两者具有正相关性（r =0.539，P＜0.05）。

3　讨论

图1　初发未治疗ITP患者的血清IL-18、CXCL10值散点图

也包括细胞免疫的失调，T细胞的异常在ITP的发生发展过程中起到的作用越来越受到重视。一般认为ITP多倾向于 Th1细胞反应[2]。Th1细胞主要分泌TNF、IFN-γ等细胞因子，这类细胞因子能清除胞内病原体，介导细胞免疫应答。在活动期ITP患者中，一些T淋巴细胞基因上调，其中与Th1优势有关的IFN-γ等因子水平显著升高[3]。近年来，有关IL-10、TNF-α等细胞因子在ITP中的表达情况研究较多[4-5]，但是IL-18、CXCL10在ITP患者血清中的表达水平方面的研究却很少。我们的研究发现，ITP患者激素治疗前血清IL-18、CXCL10的表达水平高于正常对照组，提示IL-18、CXCL10在ITP患者的疾病发生过程中可能起到一定的作用。

IL-18最初被命名为“IFN-γ诱生因子”，具有强大的诱生IFN-γ能力，能够加强FasL介导的Th1类细胞毒效应，是Th1和Th2细胞分化的重要决定因子。作为T细胞炎症介质的强力诱导者，IL-18在类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、再生障碍性贫血等疾病的患者中已经检测出其表达失衡。任敏[6]等检测了34例类风湿性关节炎（RA）患者外周血清IL-18水平，RA活动组的表达水平显著高于正常对照组，高度活动组显著高于低度活动组，提示血清中IL-18作为信号转导的下游致炎因子，在RA发病机制中起重要作用。单宁宁[7]等分析29例再生障碍性贫血（AA）患者血清IL-18水平，结果显示AA患者血清IL-18较正常对照组明显升高，其中重型AA患者升高更为明显，提示其在AA患者的免疫紊乱和发生、发展中起着一定作用。

CXCL10能趋化招募活化的T细胞和巨噬细胞等炎性细胞迁移，主要介导Th1型炎症反应，通过一系列信号转导途径介导免疫细胞的迁移、活化，参与多种疾病的免疫调控。许多研究表明，CXCL10参与自身免疫性疾病的发生发展。孟凤苓[8]等采用双抗夹心ELISA法检测不同临床阶段Graves病（GD）患者和正常对照者血清CXCL10水平，发现GD未治疗组及复发组高于缓解组及正常对照组，提示其可以作为评估GD患者疾病免疫状态外周血的标志物。黄海峰等[9]检测35例寻常型银屑病患者血清CXCL10的表达情况，研究发现患者血清CXCL10的表达水平明显高于正常对照组。张铭明[10]等检测96例系统性红斑狼疮（SLE）患者血清CXCL10表达水平并对亚组进行分析，结果显示CXCL10的表达水平与SLE疾病活动性密切相关，尤其对狼疮肾炎及疾病活动的早期检测具有重要意义。

本研究结果显示，ITP患者在经过激素治疗后血清IL-18、CXCL10表达水平与治疗前相比均显著下降，其中有效组IL-18、CXCL10的表达水平与正常对照组比较无统计学意义，而无效组的表达水平无明显下降，显著高于有效组及正常对照组。这提示IL-18、CXCL10在ITP的发展过程中可能发挥一定的作用，其表达水平的变化可能与预后有关。同时，对初发未治疗ITP患者血清IL-18、CXCL10的表达水平进行相关性分析表明，两者具有正相关性。分析原因，IL-18具有强大的诱生IFN-γ能力，而在IFN-γ的刺激下CXCL10分泌增加，两者共同作用，调控Th1型炎症反应。因此，上述结果表明，在ITP的发病及治疗过程中IL-18、CXCL10可能相互作用，共同发挥免疫调节作用。联合检测IL-18、CXCL10有望在ITP的病情监测、预后判断及治疗方案的选择等方面提供依据。

参考文献

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基金项目：昆山市社会发展科技计划项目，项目编号KS1334

通讯作者：张兴利，E-mail：zhangxingli2013204@163.com

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.24.029

【文章编号】1674-9308（2015）24-0045-03

【文献标识码】B

【中图分类号】R558