大黄水提液对戊四唑癫痫大鼠的脑保护作用

张慧杰1，张文风1*，杨焱2

(1.长春中医药大学,长春 130117;2.吉林省肿瘤医院，长春 130012)

摘要：目的观察大黄对戊四唑(pentylenetetrazol，PTZ)癫痫大鼠的脑保护作用。方法采用戊四唑复制癫痫大鼠模型,给予大黄4、2、1 g/kg，灌胃1次/d。观察大鼠的惊厥发作频率、发作潜伏时间及行为变化。测定脑组织超氧化物歧化酶(superoxide,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷光甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活性。结果大黄可延长戊四唑癫痫大鼠发作潜伏期，大约1 min，缩短持续时间2 min左右。提高脑组织SOD含量10 U/mg、GSH-PX活性10 U/mg，降低MDA水平1 nmol/mg。结论大黄可以对抗戊四唑大鼠癫痫发作及脑组织氧化，对癫痫有一定的防治作用。

关键词：大黄；癫痫；脑保护；大鼠

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.025

中图分类号：R285.5文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)10-1053-03

基金项目:吉林省中管局资助项目(2010-008)。

作者简介:张慧杰(1989-)，女，硕士研究生，主要从事中药复方的配伍及机理研究。

收稿日期:(责任编辑：赵玉芝2015-07-06)

*通信作者:张文风,电话-13154352263，电子信箱-wenfzh@163.com

Protective effects on brain of water extract of rhubarb after epilepsy by pentylenetetrazol in rats

ZHANG Huijie1,ZHANG Wenfeng1*,YANG Yan2

(1.Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China;

2.Tumor Hospital of Jilin Province,Changchun 130012,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the protective effects on brain of rhubarb after epilepsy by pentylenetetrazol.MethodsA epilepsy model on rats was establ-ished by injecting pentylenetetrazol,the rats were respectively treated with rhubarb 4 g/kg，2 g/kg and 1 g/kg,one time a day.Observing the frequency of convulsions attacking on rats,the incubation time and behavioral changes.The brain tissue superoxide (SOD),malondialdehyde (MDA) and glutathione peroxidase (GSH-Px) activity were measured.ResultsRhubarb could extend the incubation period of rats abou 1 minute after Epilepsy by pentylenetetrazol,reduce the duration of about 2 minutes,increase the activity of SOD of 10 U/mg,GSH-Px of 10 U/mg and decrease MDA content of 1 nmol/mg.ConclusionRhubarb could fight epilepsy by pentylenetetrazol in rats and oxidation of brain tissue.It is proved that rhubarb can obviously prevent and cure epilepsy.

Keywords:rhubarb;epilepsy;brain protection;rat

大黄味苦性寒，具有泻热通便，消散痈肿，清热燥湿，逐瘀通经的功效[1]。张锡纯解：“大黄能开心下热痰以愈疯狂，降肠胃热实以通燥结，其香窜透窍之力又兼利小便”[2]。《神农本草经》谓大黄有“荡涤肠胃,推陈致新”之妙。能刺激胃肠道的蠕动，产生泻下作用，虽性寒主治热性便秘，但经合理的配伍，制性取用，临床对寒秘、气结秘、血结秘、食积秘、阴血虚秘均有显著疗效[3]。《医方集解》中记载:“大黄苦寒峻猛，能下燥结而去瘀热，加以蒸晒，则药性缓和。”现代药理研究发现，大黄具有保肝利胆、活血的作用，可以预防和改善乙型肝炎的发作[4]，具有抗菌作用,对多种菌种有抑制作用[5]，能够预防和避免肝性脑病的发生[6]。临床可治疗肠梗阻、急性胰腺炎、肾病、急性呼吸窘迫综合征、皮肤病、新生儿高胆红素血症[7]。癫痫是神经系统常见的一种疾病，由神经元异常放电所导致，虽然国内研究学者也指出大黄可有效减轻脑水肿，预防脑缺血的发生，临床应用可防治癫痫发作[8-9]，但对其作用机制研究甚少，本研究旨在通过戊四唑所致的癫痫大鼠模型对大黄的抗癫痫作用及机理进行初步研究，为癫痫的治疗提供更多的思路。

1实验材料

大黄水煎液(大黄饮片购于北京同仁堂大药房,长春中医药大学药学院王淑敏教授对药品质量进行了严格鉴定。水提液的制备:大黄饮片100 g，水煎煮3次，第1次加水10倍量，煎煮2 h;第2次和第3次加水8倍量，煎煮2 h，合并水煎液，滤过，加热高温浓缩至每毫升含生药1 g，备用。);戊四唑(北京三博远志生物技术有限公司)；士的宁注射液(天津市人民制药厂)。健康雄性Wistar大鼠，体质量(240±20) g，由吉林大学实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(吉)2003-0007。SOD、MDA、GSH-PX试剂盒(南京建成生物工程研究所提供)。高速冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)；高速匀浆机(上海佛鲁克流体机械有限公司)；721型分光光度计(上海精密仪器厂)；FA1004型号电子天平(上海精科仪器有限公司)。

2实验方法

2.1模型制备参考Diehl的PTZ致痫方法[10]复制癫痫模型。取健康雄性大鼠，皮下注射PTZ，剂量35 mg/kg，1次/d。

2.2观察指标观察大鼠的行为，记录癫痫发作强度、发作时间以及持续时间。癫痫发作的分级标准按Smialowki癫痫的发作标准分级。0级：大鼠无任何反应；1级:面部运动，鼻子抽动，点头，奔跑；2级：双前肢痉挛；3级：前肢痉挛伴活动后退；4级:全身痉挛，伴后退行为及摔倒；5级:活动后摔倒，强直发作。连续3次腹腔注射PTZ后，均表现为4～5级的发作，为点燃成功。此时PTZ注射由每天1次改为间隔3 d 1次,剂量不变，以维持点燃效应，作为大鼠模型成功。

2.3分组给药将癫痫模型大鼠40只随机分为4组,即模型组和中药大黄高剂量组、中剂量组、低剂量组，并取10只同批次大鼠作为正常对照组。大黄组灌胃给予大黄水提液4、2、1 g/kg ，模型组及正常组灌胃给予等体积的生理盐水，1次/d，连续灌胃14 d。

2.4取材检测实验期满后，将大鼠断头取脑，用滤纸擦干残血，用分析天平称重,按1∶9(W/V)加入生理盐水，匀浆器匀浆后，3 000 r/min离心15 min，吸取上清液，制成10%脑组织，放入-20 ℃冰箱冷冻保存待用。采用化学比色法测定SOD、MDA、GSH-PX活性,操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

3结果

3.1大黄对PTZ大鼠惊厥潜伏期的影响见表1。

表1　大黄对PTZ大鼠惊厥潜伏期的影响 ± s)

注：与模型组比较，#P<0.05

3.2大黄对PTZ大鼠脑组织SOD、MDA、GSH-PX的影响见表2。

组 别SOD/(U/mg)MDA/(nmol/mg)GSH-PX/(U/mg)正常组 65.09±6.15#3.23±0.46#59.20±5.16#模型组 38.36±4.83 4.57±0.56 40.75±3.10 大黄低剂量组40.23±6.43 4.45±0.35 43.36±5.74 大黄中剂量组46.58±6.12#4.32±0.41#46.21±4.58#大黄高剂量组53.40±6.42#3.84±0.73#51.16±5.47#

注：与模型组比较，#P<0.05

4讨论

《素问·奇病论》曰：“人生而有病癫疾者……病名为胎病，此得之在母腹中时，其母有所大惊，气上而不下，精气并居，故令子发为癫疾也。”《诸病源候论·癫狂候》指出：“癫者，猝发仆地，吐涎沫，口喎，目急，手足缭戾，无所觉知，良久乃苏。”本病病因复杂，病程长久。

现代药理研究表明，大黄具有泻下、保肝利胆、抗病原微生物、止血、抗肿瘤、免疫抑制、肾功能不全的改善、精神调治等作用[11]。其化学成分复杂，主要有蒽醌类、蒽酮类、二苯乙烯苷类以及鞣质类化合物[12]，其中主要的有效成分是蒽醌苷及游离蒽醌衍生物，且致泻强度与蒽醌含量呈一定的量效关系[13]。

现代医学认为，癫痫发病过程中，氧自由基可直接损伤神经细胞[14]。氧自由基形成后可导致膜磷脂和蛋白质的过氧化反应并损伤DNA,攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化反应，形成脂质过氧化物[15]。因此,测定MDA水平可以作为脂质过氧化反应程度的一个指标。自由基清除剂SOD是有效的保护神经物质，所以提高SOD活性的药物能够有效防止脂质过氧化反应的发生，从而保护脑组织不受损害，降低癫痫的发病率[16]。

本次实验结果表明，大黄可有效延长大鼠癫痫的发作潜伏期，缩短发作时间。而且模型组与正常组比较，SOD和GSH-PX含量显著下降，MDA水平明显上升。说明大黄可提高脑组织SOD、GSH-PX活性，降低MDA水平，表明大黄可以抑制氧自由基的生成，提高超氧化物歧化酶活性，有效清除氧自由基，这种抗氧化作用能够有效地减轻继发的神经细胞损伤，也说明了大黄可能是通过抗氧化作用达到了防治癫痫的作用。近年来，有学者通过对《中医方剂大辞典》中治疗癫痫有效药物的统计研究发现，有10味中药在治疗癫痫中使用频率较高，其中便有中药大黄[17]。中医学认为，癫痫发病原因不外乎先天因素、七情失调、脑部外伤等。本病多由痰作祟，因风、火触动，痰瘀互结，蒙蔽清窍，气机闭阻而发病，有虚实之分，后期多虚实夹杂，病位在脑，与五脏相关，但主要责之于肝，肝风内动、风痰上扰是其主要病机特点。中医学从整体观念出发，结合体质、社会环境因素，治以镇肝熄风、豁痰健脾、化瘀通窍，加之饮食护理、心理护理，每收良效[18]。在临床用药时，有学者主张在中西医结合的理论指导下，中西药分开用药，不主张在中药制剂中添加抗癫痫药，以免造成大部分药物在血中含量均达不到有效浓度，使患者出现中毒症状，造成不必要的损失，同时避免“医源性难治性癫痫”的发生[19]。大黄入脾、胃、肝经，可破痰实，通脏腑，降湿浊，治疗癫狂惊痫。临床以方剂凉膈散[20]、地黄饮子为基础方加减应用，疗效显著，患者满意度高，但其作用机制有待于进一步实验研究证实。

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