■ 陈善真 李其昌 赵 敏 刘博奇 王志花 杨 洁 王贵平 钱雪桥 陈克宏

（1.广东海大集团股份有限公司，广东广州 511400；2.广东海大畜牧兽医研究院，广东广州 511400）

维生素E是鱼类的重要营养成分之一，目前国内外学者对其生理作用及理化性质研究的比较透彻[1-3]。维生素E作为水产动物的抗氧化剂，在促进水产动物生长、提高水产动物的繁殖性能、免疫能力，以及改善水产动物的肉品质等多方面均可发挥作用[4-8]。目前国内的维生素E供应主要依赖化学合成，多数厂家均是以间甲酚等为基础原料，经过20多步化学反应制备，生产成本较高，因此维生素E原料的价格居高不下，而维生素E又是动物饲料中必需添加的重要营养成分[9-10]，其价格的高低对饲料成品的价格有直接影响。维生素E类似物的研究近几年较多[11]。本研究拟测试一种生产成本低廉且分子量较小的新型维生素E类似物（VEa）的生物活性，通过测定其对异育银鲫的生长性能、血液、组织生化指标及抗氧化能力的影响，验证其是否可在水产动物的代谢和生长中发挥同样作用，又可降低原料生产成本或是在饲料中的添加量，从而达到降低饲料中维生素E添加成本的目的，同时确定维生素E类似物在异育银鲫饲料中的添加量。

1 材料与方法

1.1 试剂与饲料

新型维生素E类似物，由乌克兰国家研究院生化实验室提供。采用商用饲料配方，其中包含基础日粮和其他多维。1号为正对照，VE含量为150 mg/kg；2号为负对照，即普通多维商用饲料，VE含量为0 mg/kg；3～8号为试验组，在去除维生素E的普通多维饲料基础上分别加入20、40、60、80、120 mg/kg和150 mg/kg的VEa，以上试验饲料均由广东海大集团金禾饲料厂按商用饲料生产工艺制作生产。

1.2 试验鱼的饲养与管理

试验所用异育银鲫为广东海大集团股份有限公司生产，品种为中科三号异育银鲫。试验采用循环水养殖系统，选取规格整齐、初始体重为（5.74±0.024）g，表观健康的试验鱼720尾，随机分养于24个水族箱中，每种饲料组设3个平行组，每个平行组30尾鱼。先以基础商用饲料训食，每天饱食投喂2次，暂养1周后，分组改用试验饲料投喂，试验周期为16周。每天饱食投喂两次（9：00和15：00），投喂后1 h，收残饵，烘干称重，记录每天的摄食及鱼的存活情况。试验水源为过滤、消毒曝气后的自来水，采用白炽灯作为光源，12 h光照，12 h黑暗。试验期间控制溶解氧大于6 mg/l、氨氮浓度小于0.5 mg/l、pH值为7.5。

1.3 样品的采集

试验开始前与结束后分别取样，取样前24 h停止投喂饵料，对每个水族箱中的鲫鱼随机选取6尾称重、测量体长，记录生长情况，计算增重率、摄食量、饲料系数以及存活率等。随即在准备好的冰盘上进行血液、肝脏和肌肉样品的采集。随机取5尾进行采血，用1 ml无菌注射器尾静脉采血，采血后立刻转移至用肝素钠浸润过的灭菌1.5 ml离心管中，轻轻振荡混匀，冰盒内保存，将抗凝血4℃、3 000 r/min离心10 min，取其上清液，-80℃保存备用；解剖后取完整肝脏，捣碎、匀浆、离心，制备上清液，置于-80℃超低温冰箱保存备用；取其背部肌肉样品称重后置于105℃干燥箱中烘干，称重后粉碎，按照国标方法测定其中的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分、钙、总磷等的含量。

1.4 指标测定

鲫鱼的血浆、肝脏样品分别测定GST、CAT活性及肝脏中抗氧化指标.羟自由基（·OH）的含量，均使用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定，测定方法参见说明书。

1.5 数据处理

所得数据用SPSS 19软件处理。对维生素E和不同水平维生素E类似物饲喂过的异育银鲫各检测指标进行单因素方差分析。当差异显著（P＜0.05）时采用Duncan's法进行多重比较；用Excel进行图形处理。数据以“平均值±标准差”表示。

2 结果

2.1 对鲫鱼生长性能的影响

饲养16周后，每个平行组随机抽取6尾，称重、测量体长，并根据每日摄食情况，计算单尾增重率、单尾每天摄食均量、饲料系数以及存活率等，具体数据见表1，饲养不同周期鲫鱼平均饲料系数比较见图1。

表1 添加不同剂量新型VE类似物对鲫鱼生长性能的影响

由表1结果可知，与VE150正对照组相比较，VEa40、VEa60、VEa80 组单尾增重率显著增加（P＜0.05）；同时VEa40、VEa60组单尾摄食量显著增加（P＜0.05）；VEa40、VEa60、VEa80 组鲫鱼平均饲料系数依次略降低，VEa80组降低较多，低了0.04，且在各饲养周期中均为最低（见图1），但差异不显著（P＞0.05）；所有VEa组比VE150组存活率高1.12%，差异不显著。由单尾增重率结果可见，用VEa40、VEa60、VEa80 mg/kg均可取代常规VE 150 mg/kg，即只用常规VE一半的量，即可对鲫鱼的生长性能产生同样或略好的效果。

2.2 对鲫鱼肌肉成分的影响（见表2）

肌肉成分指标均以干重计算，由表2可见，与常规维生素E（正对照）相比，新型VE类似物的添加对鲫鱼肌肉的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分等含量的影响差异不显著（P＞0.05），这说明新型维生素E类似物作为维生素E的替代物对鲫鱼肌肉的营养成分没有影响。

2.3 对血清GST、CAT，肝脏GST、CAT以及肝脏羟自由基（·OH）的影响（见表3）

由表3结果可见，与VE150正对照组相比：从添加VEa20到VEa150各组鲫鱼血清中谷胱甘肽-S转移酶（GST）（参与肝脏解毒）活性均增加显著（P＜0.05），且依次递增（VEa150 组除外），VEa40、VEa120、VEa150组鲫鱼肝脏中GST活性显著降低（P＜0.05），VEa60组肝脏中GST活性显著升高（P＜0.05），而VEa150组与其它VEa添加组相比，血清和肝脏中的GST活性均降低，这说明高剂量的VEa反而会抑制鲫鱼体内谷胱甘肽-S转移酶的活性；VEa60、VEa80、VEa120各组鲫鱼血清中过氧化氢酶（CAT）（体内重要的抗氧化酶）活性明显增加（P＜0.05），而VEa150组CAT活性明显降低（P＜0.05）；VEa40、VEa60、VEa80组鲫鱼肝脏中过氧化氢酶CAT的活性明显增加，而VEa20、VEa120及VEa150组CAT活性明显降低（P＜0.05），这说明适当剂量（40～80 mg/kg）的 VEa 可以提高鲫鱼体内的抗氧化能力；VEa40、VEa60、VEa80组鲫鱼肝脏中羟自由基（·OH）明显降低（P＜0.05），而VEa20、VEa120、VEa150组羟自由基（·OH）明显升高（P＜0.05），过高或过低剂量的VEa均会对鲫鱼机体的抗氧化能力产生抑制作用。这说明，只需VE150组大约一半剂量的VEa就可明显提高鲫鱼的抗氧化力，同时显著抑制体内羟自由基（·OH）。

图1 添加新型VE类似物对鲫鱼不同饲养周期饲料系数的影响

表2 添加新型VE类似物对鲫鱼肌肉成分的影响（%）

表3 新型维生素E类似物的添加对鲫鱼血清GST、CAT，肝脏GST，CAT以及肝脏羟自由基（·OH）的影响

3 讨论

以往研究表明，维生素E缺乏通常会影响水产动物的食欲、生长和饲料利用率、血清生化指标及抗氧化能力指标等[12-14]，因此本研究通过测定新型维生素E类似物对异育银鲫生长性能，血清、肝脏生化指标及抗氧化能力的影响来评估新型维生素E类似物是否可以取代饲料中常规维生素E的添加。

鱼体的肌肉常规成分与其生理机能关系密切，其中蛋白质供鱼体生长和发育，其含量反映了鱼体的生长状况和肉品质量[15]。目前，维生素E对异育银鲫的生长情况研究较少，本研究结果显示，新型维生素E类似物取代常规维生素E（150 mg/kg）添加后可以促进异育银鲫的生长，平均饲料系数和存活率与正对照组相比，差异不显著，且对肌肉成分无显著影响。与常规VE150添加组相比较，VEa40、VEa60、VEa80 组单尾增重率显著增加（P＜0.05），同时VEa40、VEa60组单尾摄食量显著增加（P＜0.05），这说明新型维生素E类似物对取代常规VE对异育银鲫的生长发挥作用。

动物体内参与清除体内过多自由基的防御系统主要包括非酶系统（如VE、VC、GST）和酶系统（如SOD、CAT），VE可显著提高机体的抗氧化能力[16]，本研究结果得到类似结果，各VEa添加组鲫鱼血清中谷胱甘肽-S转移酶（GST）的活性均增加显著（P＜0.05），VEa60组肝脏中GST活性显著升高（P＜0.05），同时高剂量的VEa反而会抑制鲫鱼体内谷胱甘肽-S转移酶的活性；VEa40、VEa60、VEa80各组鲫鱼肝脏中过氧化氢酶CAT活性明显增加，肝脏中羟自由基（·OH）明显降低（P＜0.05），而剂量过高或过低组（VEa20、VEa120、VEa150）均会对机体的抗氧化能力产生抑制作用，这与常规VE的研究报道结果一致[17]。这说明，只需VE150组大约一半的剂量的VEa（60 mg/kg）就可明显提高鲫鱼生物活性及抗氧化力，同时显著抑制体内羟自由基（·OH）。

4 结论

综上所述，新型维生素E类似物可以作为常规维生素E的替代物用作饲料添加剂，其不仅可以促进异育银鲫的生长，提高机体的血清和组织抗氧化酶活性，且其用量可降低至60 mg/kg，同时由于其合成步骤的简便，使其成本较常规VE的合成相比降低至少30%，因此，新型维生素E类似物的应用不仅可与常规维生素E发挥相同或更佳的生物作用，同时可有效降低饲料成本。