王雪晶，丁雪冰，滕军放，马明明，王志红

(1.郑州大学第一附属医院神经内科，河南 郑州450052;2.河南省人民医院神经内科，河南 郑州450003;3.郑州大学第二附属医院妇产科，河南 郑州450014)

神经节苷脂(monosialotetrahexosy-1 ganglioside， GM1)是细胞膜的主要成分［1］。以往研究［2］发现外源性GM1 与脂蛋白结合，可通过血脑屏障进入中枢神经系统，参与神经修复及重构的病理生理过程。胶质瘤是常见的颅内原发肿瘤，至今为止没有有效的治疗手段。本课题组之前研究已证实GM1 通过上调巨自噬水平诱导了胶质瘤细胞的自噬性死亡，本研究进一步探讨GM1 通过调控恶性脑胶质瘤细胞U251 内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERS)诱导其凋亡的具体机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 人脑星形胶质瘤细胞系U251 购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，常规培养于含体积分数12%胎牛血清的DMEM 完全培养基中，置于37 ℃、体积分数5% CO2细胞培养箱中培养，每1 ～2 d 换液1 次。待细胞铺满培养瓶底90%后，以消化液(含质量分数0.3%胰蛋白酶和质量分数0.05%EDTA)消化，1∶4 比例传代。

1.2 MTT 法检测细胞存活率 U251 细胞接种于96孔板(密度为3 × 103/孔)，次日对照组给予常规DMEM 培养基，实验组分为3 个浓度组，分别加入0、100、250 μg·mL－1的GM1，每组设4 个复孔，培养48 h，弃培养基，每孔加10 μL MTT 和90 μL 无血清DMEM 培养基，37 ℃孵育2 h，加入150 μL DMSO 振荡溶解，酶标仪于570 nm 波长处测量吸光度(A)值，细胞存活率(%)=实验组A 值/对照组A 值×100%。

1. 3 LDH 释放检测 实验组加入0、100、250 μg·mL－1的GM1，培养48 h 后，收集细胞培养基，按照LDH 试剂盒说明操作并计算LDH 释放率。

1.4 流式细胞术检测细胞凋亡 实验组加入0、100、250 μg·mL－1的GM1，48 h 后收集细胞，预冷1 ×PBS洗涤后弃去上清，重……