正交试验优选绞股蓝口服液的最佳工艺
2015-12-08程宗琦
王 尧， 程宗琦， 吴 憩
（苏州大学附属第一医院药剂科，江苏苏州215006）
正交试验优选绞股蓝口服液的最佳工艺
王 尧， 程宗琦， 吴 憩
（苏州大学附属第一医院药剂科，江苏苏州215006）
目的 优选绞股蓝口服液的最佳工艺。方法 以绞股蓝总皂苷为指标，紫外-可见分光光度法测定其含有量，L9（34）正交试验法优选最佳工艺。结果 最佳提取条件为12倍量水，煎煮3次，每次1 h。结论 该工艺稳定可靠，可为制剂生产提供依据。
绞股蓝口服液；绞股蓝总皂苷；紫外-可见分光光度法；正交试验
绞股蓝别名七叶胆、南人参，系葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum（Thunb.）Makino的干燥根状茎或全草，在我国主要分布于秦岭和长江以南地区，如陕西安康、湖北神农架、广西金秀等，其中陕西安康为该植物原产地。中医认为，绞股蓝具有清热解毒、祛痰止咳、镇静安神、益气强身等功效，药理和临床试验表明，其提取物具有明显的降血脂、降血糖、抗溃疡、抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老、保肝及增强免疫功能等作用，该植物的主要药效成分为绞股蓝总皂苷，其中绞股蓝皂苷Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ、Ⅻ分别与人参皂苷Rb1、Rb3、Rd、K的结构相同。本实验采用正交试验法对其工艺进行优化，以期获得最佳工艺参数，为制剂生产提供科学依据。
1 仪器与试药
UV-1800型紫外可见分光光度计 （日本岛津公司）；AL-204型电子天平 （瑞士梅特勒-托利多公司）；RE-3000A旋转蒸发器 （上海亚荣生化仪器厂）；HHS型电热恒温水浴锅 （天津市华北实验仪器有限公司）。
人参皂苷Rb1对照品 （批号110704-200420，中国食品药品检定研究院）。绞股蓝 （批号131116，产地陕西安康）。95%乙醇 （太仓新太酒精有限公司）；甲醇、高氯酸、冰醋酸均为分析纯 （天津市大茂化学试剂厂）。
2 方法与结果
2.1 不同溶剂提取试验
2.1.1 提取溶剂的选择 针对绞股蓝所含的活性成分，本实验以绞股蓝总皂苷含有量为指标，比较水、70%乙醇对其提取率的影响。
2.1.2 提取方法
2.1.2.1 水提法 取绞股蓝80 g，加入8倍量水，回流提取两次，每次1 h，过滤，滤液合并，减压浓缩至200 mL左右。
2.1.2.2 醇提法 取绞股蓝80 g，加入8倍量70%乙醇，回流提取两次，每次1 h，过滤，滤液合并，减压浓缩至200 mL左右。
2.2 绞股蓝总皂苷含有量测定方法学考察
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥的人参皂苷Rb1对照品10 mg，置于5 mL量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为2.0 mg/m L的贮备液。
2.2.2 样品溶液的制备 按 “2.1.2.1”项下方法制备。
2.2.3 吸收波长的确定 精密量取对照品贮备液100μL，置于15 mL具塞试管中，挥干甲醇，加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0.4 mL、高氯酸1.6 mL，摇匀，密塞，置60℃水浴中加热15 min后取出，立即用冷水冷却至室温，精密加入冰醋酸10 m L，摇匀。另精密量取甲醇溶液100μL，置于15 mL具塞试管中，同法操作，作为空白溶液，于400～800 nm处进行紫外扫描，确定最大吸收波长。结果表明，人参皂苷Rb1在550 nm处有最大吸收。
2.2.4 线性关系的考察 精密量取对照品贮备液50、100、150、200、250μL，分别置于 15 mL具塞试管中，按“2.2.3”项下方法操作。另精密量取甲醇溶液250μL，置于15 mL具塞试管中，同法操作，作为空白溶液，在550 nm波长处测定吸收度。以吸光度 （A）对人参皂苷Rb1取样量（C）进行回归，得到回归方程A=0.672C+0.020 2，r=0.990 9，说明人参皂苷Rb1取样量在0.10～0.50 mg范围内线性关系良好。
2.2.5 精密度试验 取对照品溶液100μL，按 “2.2.3”项下方法操作，连续进样5次，测定吸光度，计算RSD。结果，RSD为0.11%，说明仪器精密度良好。
2.2.6 重复性试验 取样品溶液20μL，共5份，按“2.2.3”项下方法操作，测得RSD为0.23%，说明该方法重复性良好。
2.2.7 稳定性试验 取样品溶液20μL，分别在0、2、4、8、12、24 h测定吸光度。结果，RSD为1.02%，说明样
品溶液在24 h内较稳定。
2.2.8 加样回收率试验 取样品溶液20μL，分别加入对照品溶液20、30、40μL，按 “2.2.3”项下方法操作，测得平均回收率为99.8%，RSD为1.08%。
2.3 不同提取方法结果的比较 精密量取提取液20μL，按 “2.2.3”项下方法操作，测定吸收度，计算绞股蓝总皂苷的含有量，结果见表1。由表可知，水和70%乙醇提取效果相当，从经济效益角度考虑，绞股蓝宜采用水煎煮的提取方法。
表1 不同提取溶剂对绞股蓝总皂苷提取得率的影响
2.4 正交试验
2.4.1 正交试验设计 为考察提取工艺条件对绞股蓝总皂苷提取率的影响，采用L9（34）正交试验表进行设计，对加水量 （A）、煎煮时间 （B）、煎煮次数 （C）进行工艺研究，以绞股蓝总皂苷的含有量为指标，确定工艺最佳参数。因素水平表见表2。
表2 因素水平
2.4.2 正交试验结果 按照因素水平进行操作，将各样品提取液浓缩成一定量，测定各正交样品中绞股蓝总皂苷的含有量，计算总皂苷提取率 （提取液中总皂苷量/药材量×100%），结果见表3、表4。由表3可知，3个因素的极差顺序为C＞A＞B，因此C（煎煮次数）对提取工艺影响最大，其次为A（加水量），B（煎煮时间）影响最小。由表4可知，因素C对提取有显著影响，A次之，B几乎无影响。考虑成本因素，确定最佳提取工艺为A3B1C3，即药材加12倍量水，煎煮3次，每次1 h。
表3 L9（34）正交试验
表4 方差分析
2.4.3 最佳提取工艺验证 按照正交试验所得的最佳提取工艺条件提取3批样品，测定其总皂苷含有量。结果表明，该工艺重复性好、条件合理、稳定可行，见表5。
表5 工艺条件的验证试验结果
3 讨论
3.1 提取溶剂的选择 在预实验中，比较水和醇的提取效果，结合文献 ［3］，选择70%乙醇进行实验研究。结果表明，水和70%乙醇提取对绞股蓝总皂苷含有量无显著性影响，但水提成本低，溶剂不需回收，而醇提须回收乙醇。因此，从经济效益、工艺步骤及安全角度考虑，本实验采用水煎煮工艺。
3.2 提取部位 绞股蓝受产地气候、土壤条件、采收时间、采样部位等因素影响，其总皂苷的含有量会有很大不同。本实验虽未对绞股蓝入药部位进行考察，但结合文献［8］报道，绞股蓝叶中总皂苷含有量比茎高4～5倍，而且以陕西安康产者为最优［9］。因此，在工艺生产中大多选择陕西安康产绞股蓝叶作为入药部位。
3.3 煎煮参数 正交试验结果显示，煎煮次数对提取工艺影响最大，其次加水量，煎煮时间影响最小。综合生产成本因素后，确定最佳工艺参数为12倍量水，煎煮3次，每次1 h。经验证，该工艺条件稳定可靠，可为制剂生产提供依据。
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R944
B
1001-1528（2015）12-2767-03
10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.044
2014-09-03
王 尧 （1983—），女，助理研究员，研究方向为医院制剂。Tel：（0512）67780477、13812777984，E-mail：wangyao01301 @126.com
