刘 晨， 任宗芬， 李建理， 胡 进， 王文苹，3，4*

（1.宁夏医科大学总医院，宁夏 银川750004；2.宁夏医科大学药学院，宁夏 银川750004；3.宁夏回药现代化工程技术研究中心，宁夏银川750004；4.回医药现代化省部共建教育部重点实验室，宁夏 银川750004）

复方薄荷脑微乳原位凝胶剂的评价

刘 晨1，2， 任宗芬1， 李建理1， 胡 进2， 王文苹2，3，4*

（1.宁夏医科大学总医院，宁夏 银川750004；2.宁夏医科大学药学院，宁夏 银川750004；3.宁夏回药现代化工程技术研究中心，宁夏银川750004；4.回医药现代化省部共建教育部重点实验室，宁夏 银川750004）

目的 对载复方薄荷脑微乳的原位凝胶滴鼻液 （薄荷脑、樟脑、液状石蜡）进行评价。方法 薄荷脑和樟脑的低共熔特性制备微乳再将其载入原位凝胶中制得载药微乳凝胶液，从制剂的外观、pH、流变学性质、体外释放度、离体黏膜透过性及对大鼠鼻黏膜形态进行考察。结果 体外释放行为符合Higuchi方程，10 h累积释放33.6%，显著优于原制剂的7.6%；10 h离体黏膜累积透过性率11.8%，约为原制剂的5倍；对大鼠鼻黏膜的刺激性较小且可逆。结论 复方薄荷脑微乳的原位凝胶滴鼻液具有良好的缓释性能且适合临床使用。

复方薄荷脑；微乳；原位凝胶；滴鼻液；体外释放度

复方薄荷脑滴鼻液收载于 《中国医院制剂规范》第2版，是医院常用的耳鼻喉科制剂。该制剂由薄荷脑、樟脑及液状石蜡组成，液状石蜡因生产厂家及批号的不同而导致质量不一，对薄荷脑和樟脑定量测定产生影响，进而使制剂质量可控性差［1-2］；同时传统滴鼻液在鼻腔的停留时间短、易流失，导致生物利用度低且个体差异较大［3］。基于上述原因，课题组前期利用薄荷脑和樟脑的低共熔特性制备微乳，并将其载入原位凝胶中制得新型滴鼻液，不仅避免了液状石蜡带来的弊端，而且延长了药物在给药部位的滞留时间。本研究进一步对所得微乳原位凝胶滴鼻液进行体内外评价，明确其在给药局部的胶凝性、渗透性和安全性，为后期新制剂的研发奠定基础。

1 仪器与试药

移液枪 （规格10～100μL，德国艾本德公司）；PHS-3E型pH计（上海仪电科学仪器股份有限公司）；H-7650透射电子显微镜 ［日立高新技术（上海）国际贸易有限公司］；WH-861涡旋混合器（江苏省太仓市科教器材厂）；Phenix YS100光学显微镜 （江西省上饶市羽天科教仪器有限公司）；DV-Ⅲ流变仪 （美国博勒飞公司）；透析袋MD34（截留分子量3500，北京索莱宝科技有限公司）；RYJ-6A药物透皮扩散试验仪 （上海黄海药检仪器有限公司）；Leica DFC 295数码显微镜彩色摄像机（德国徕卡仪器有限公司）；Leica EG150H组织包埋机（德国徕卡仪器有限公司）；Leica RM2235组织切片机 （德国徕卡仪器有限公司）。

氯化钙 （烟台市双双化工有限公司，批号20130402）、氯化钾 （天津市大茂化学试剂厂，批号20120925）、氯化钠 （天津市大茂化学试剂厂，批号20111029）、碳酸氢钠 （天津市瑞金特化学品有限公司，批号20100604）、水合氯醛 （天津市光复精细化工研究所，批号20131202）、固定液 （宁夏医科大学总医院病理科提供）、PBS缓冲液 （宁夏医科大学总医院病理科提供），复方薄荷脑滴鼻剂（宁夏医科大学总医院制剂中心，批号20140121）以上所用试剂均为分析纯。所用水均为去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 根据文献方法［4］做了相应调整。采用Hitachi L2000型高效液相色谱仪，ODS C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇-水（75∶25），体积流量1.0 mL/min，检测波长289 nm；进样量10μL。柱温为室温。

2.2 人工鼻液的配制 根据文献配制［5］，氯化钠7.91 g、碳酸氢钠2.56 g、氯化钾3.68 g和氯化钙0.51 g，混匀溶解于去离子水1 L中即得。

2.3 微乳原位凝胶滴鼻液的制备 以薄荷脑-樟脑 （1∶1）研磨后所形成澄清透明的低共熔混合溶液作为油相，将油相1.0 g、吐温-80 2.0 g和甘油1.0 g加入试管中涡旋混匀，加1 mL去离子水充分混匀即得微乳；0.05 g去乙酰结冷胶加入至5 m L去离子水中，90℃下溶解后，冷却，加0.02 g海藻酸钠，于4℃冰箱中过夜，即得原位凝胶；将制备好的微乳液1 mL加入原位凝胶中，再加入去离子水至10 m L，混匀，即得微乳原位凝胶（含薄荷脑和樟脑各1%）。

2.4 微乳原位凝胶滴鼻液的评价

2.4.1 外观和pH 所得复方薄荷脑微乳原位凝胶剂为液态，呈半透明状且有淡蓝色乳光，具良好的流动性；加入人工鼻液后发生凝胶化，倒置后不流下。取适量微乳原位凝胶剂样品，去离子水稀释100倍，用PHS-3E型pH计测定微乳原位凝胶pH。结果该制剂平均pH为6.17±0.06（n=3），与正常人鼻腔分泌液pH（5.5～6.5）相近［6］，说明该

制剂pH适合鼻腔给药。

2.4.2 流变学性质 采用DV-Ⅲ流变仪，控制温度为 （33±0.5）℃ （人体鼻腔温度32～34℃［7］），选择小量样品适配器 （SC4-31号转子），分别考察微乳原位凝胶剂在加入人工鼻液前后剪切速率增大时黏度的变化情况。结果见图1。

未加入人工鼻液的制剂具有一定的黏度，随剪切速率的增大呈下降趋势；加入人工鼻液后制剂黏度明显增大，随剪切速率的增大黏度呈明显下降趋势，当体系黏度降低到一定值后，黏度随剪切率的变化趋于平稳，表现出假塑性流体的特征，这种特征对鼻液的分泌影响较小，对鼻腔的刺激也较小。加入人工鼻液后制剂黏度值＞5 Pa·s，在鼻腔中黏附性能较好［8］，适合鼻腔给药。

2.4.3 体外释放 分别精密量取4.0mL的复方薄荷脑微乳凝胶液及复方薄荷脑滴鼻液 （原制剂）于透析袋MD34中，透析袋置于带盖锥形瓶内，加入新鲜配制人工鼻液50 mL作为释放介质，转速100 r/min，（33±0.5）℃，依次于5、15、30、60、90、180、240、360、480、600 min取样1.0 mL，每次取样后补加等体积的释放介质。取出的样品经0.22μm微孔滤膜滤过，HPLC法测定其释药量，计算各时间点药物的累积释放百分率 （Q），绘制体外释放曲线，见图2。用零级方程、一级方程、Higuchi方程对释放曲线进行拟合，按r值最大原则来判断各模型的拟合优劣，结果见表1。

图2 微乳凝胶剂与原制剂累积释放百分率Fig.2 In vitro release of MBGs and nasal d rops

表1 释药曲线拟合结果Tab.1 Fitting equations of drug release

两组制剂释药均呈缓慢上升趋势，微乳原位凝胶剂的释药速率显著高于原制剂，其在前6 h释放较快，10 h时释放达 33.58%，原制剂仅为7.60%。微乳原位凝胶剂中药物释药遵循Higuchi方程，具显著的缓释作用，原制剂药物的释放在3种模型中拟合r值均较高，接近0.98，推测其原因可能是原制剂中的溶剂为液状石蜡，含量达98.0%，阻滞了药物的释放。对于微乳原位凝胶剂而言，药物先从微乳内油相扩散到外水相，再从胶凝网状结构中释放出来，因而有效延缓了药物从基质中的释放［9］。

2.4.4 离体黏膜透过试验 采用药物透皮扩散试验仪，扩散面积为2.89 cm2。处置干净的新鲜猪大肠剥离脂肪组织后，取大肠黏膜层用生理盐水清洗干净，黏膜层向上固定在供给池与接受池之间，接收池内加入人工鼻液 （为达到药物漏槽条件，加入5%Tween-80和5%甘油），置温度 （37± 0.5）℃的水浴恒温振荡器中平衡20 min；分别取2.5 mL微乳原位凝胶及原制剂均匀覆盖黏膜上，转速 300 r/min，于 5、15、30、60、90、180、240、360、480、600 min从接收池取样1.0 m L，每次取样后补加同体积人工鼻液，取得的样品经

0.22μm微孔滤膜滤过，HPLC法测定其释药量，见图3。

结果10 h时离体黏膜微乳凝胶组累积透过率为11.79%，原制剂组为2.48%。表明微乳凝胶剂透黏膜释放速度较原制剂快，其黏膜透过性更佳。

图3 微乳凝胶剂及原制剂随时间离体黏膜透过率Fig.3 In vitro permeation behavior of MBGs and nasal drops

2.4.5 对大鼠鼻黏膜形态的影响 雄性SD大鼠，随机分成生理盐水组、空白基质组、原制剂组、微乳凝胶组、微乳凝胶恢复组，每组8只。各组每日给药3次，以连接PE塑料软管的微量注射器定量注入30μL相应液体进大鼠鼻孔，连续给药7 d，微乳凝胶恢复组停药后继续观察2 d。以10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后断头处死，立刻开放鼻腔取鼻中隔黏膜，以0.01 mol/L、pH 7.4 PBS缓冲液洗血液和黏液，放置于10%中性缓冲甲醛溶液中固定，4℃保存，制备石蜡切片，HE染色，光学显微镜下观察。

图4是进行HE染色后在200倍电子显微镜下观察到的大鼠鼻黏膜图，可观察到生理盐水组（A）鼻黏膜细胞大部分排列紧密，原制剂组 （C）少部分上皮细胞有破损，有轻度充血及炎性细胞浸润现象；空白基质组 （B）与微乳原位凝胶组（D）鼻黏膜细胞有少量的炎性细胞浸润现象，微乳原位凝胶组充血现象明显，提示微乳凝胶剂中的基质、辅料及药物均可能对黏膜产生刺激作用；微乳原位凝胶恢复组 （E）有轻微充血及炎性细胞浸润，说明停药后能够较快恢复，表明基质、辅料及药物所致的黏膜损伤是可逆的。

3 讨论

图4 各实验组的组织切片Fig.4 H istological sections of the nasal m ucosa in fiveexperimental groups

药物从基质中的释放是影响渗透和吸收的限速步骤。本研究中微乳原位凝胶剂是水溶性凝胶基质，可与人工鼻液相混溶，其表面活性剂、助表面活性剂可以增加药物的溶解度及上皮细胞黏膜通透性，促进药物通过黏膜［10］，其与薄荷脑、樟脑的亲和力小，药物的释放易于亲和力大的基质；原制剂中液状石蜡是一类疏水性强的蜡类阻滞基质，与人工鼻液不相混溶，与薄荷脑、樟脑的亲和力大，对药物的释放阻滞效应远高于水溶性凝胶基质，所以在体外释放度和离体黏膜透过性试验中，微乳原位凝胶剂均显著优于原制剂。离体黏膜透过性试验中，因受鼻黏膜取材面积、取材新鲜度、损伤程度等因素的影响，无法达到动物鼻黏膜取材要求［11］，而选择了新鲜的猪大肠黏膜进行试验，虽然猪大肠黏膜无法代替鼻黏膜，但在相同试验条件下，试验结果在一定程度上也能反映制剂的黏膜透过性。

本研究对复方薄荷脑微乳原位凝胶滴鼻液的胶凝性、渗透性和安全性进行了系统考察，结果显示该制剂在非生理条件下有良好的流动性，在生理条件下具良好的凝胶性能及黏附性，预期鼻腔给药后可延长药物局部滞留时间、利于发挥药效，且制剂具有良好的缓释特性，能显著改善体外释放度和离体黏膜透过性，刺激性小。本研究为剂型改进奠定了基础，为相关新产品开发提供参考。

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Evaluation of com pound m icroemulsion based in situ gel containing menthol

LIU Chen1，2， REN Zong-fen1， LIJian-li1， HU Jin2， WANGWen-ping2，3，4*

（1.General Hospitalof Ningxia Medical University，Yinchuan 75OOO4，China；2.School of Pharmacy，Ningxia Medical University，Yinchuan 75OOO4，China；3.Ningxia Engineering&Technology Research Center for Modernization of IslamicMedicine，Yinchuan 75OOO4，China；4.Key Lab for Islamic

MedicineModernization，Ministry of Education，Yinchuan 75OOO4，China）

AIM To evaluate the efficacy of nasalmicroemulsion based in situ gel（MBG）made up ofmenthol，camphor and liquid paraffin.METHODS The preparation made from amixture ofmenthol and camphor as eutectic microemulsion for in situ gel，had its appearance，pH，rheological property，dissolution，in vitro mucosa permeability and morphology examined.RESULTS The in vitro release profile conformed to Higuchi model，33.58%cumulative release at10 h was superior to the previous7.60%value of nasal dropswithoutmicroemulsion. The in vitro permeation percentage 11.49%was almost5 folds of the 2.48%nasal drops withoutmicroemulsion. The irritability induced by MBG was rare and slight and reversible.CONCLUSION MBG of compound menthol excels in in vitro release and permeation，and should be appropriate for clinical use.

compound menthol；microemulsion；in situ gel；nasal drops；in vitro release

R944

A

1001-1528（2015）12-2632-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.013

2015-05-22

2012年宁夏回族自治区自然科学基金项目 （NZ1226）

刘 晨 （1975—），女，硕士，副主任药师，研究方向为药物制剂与医院药学。Tel：（0951）6743516，E-mail：lch6767@ 163.com

*通信作者：王文苹 （1977—），女，博士，教授，研究方向为新型递药系统及载药材料。Tel：（0951）6880581，E-mail：wangwenpingg @sina.com