APP下载

特发性不育患者Y染色体AZF微缺失筛查及表型分析

2015-12-02黄海龙陈雪美王林铄徐两蒲

中国计划生育学杂志 2015年12期
关键词:精症生精特发性

王 燕 林 元 黄海龙 林 娜 李 英 陈雪美 王林铄 徐两蒲

福建省妇幼保健院产前诊断中心(福州,350001)

育龄人群中10%~15%的夫妇不育,其中男方因素占40%~50%[1]。造成男性不育的因素很多,以生精障碍最为常见,主要表现为严重少精子症或无精子症。在生精障碍患者中约有30%与遗传因素有关,15%的无精或重度少精不育与Y染色体无精子症因子(AZF)缺失有关,成为男性不育遗传学研究和临床检测的热点。本文对1700例特发性不育男性患者Y染色体AZF缺失情况进行分析。

1 对象和方法

1.1 对象

收集2009年1月~2014年8月于福建省妇幼保健院就诊的无精子症及少精子症男性不育患者,共1816例,通过相关实验室检测及临床检查,排除全身性疾病、泌尿生殖道感染、逆行性射精、输精管阻塞、精索静脉曲张及隐睾等非特发性不育病例116例,最终1700例不明原因,即特发性不育患者,平均年龄31.32(20~49)岁。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 抽取对象2ml外周血加入EDTA的抗凝管,按照全血DNA提取试剂盒(QIAGEN公司)说明书提取DNA,紫外分光光度计测定DNA含量。

1.2.2 AZF缺失检测 使用Y染色体微缺失基因检测试剂盒(深圳亚能生物技术有限公司)进行多重PCR扩增 ,该试剂盒设计了15对PCR引物扩增AZF区域的15个序列标签位点(STS),同时设计1对PCR引物扩增SRY基因,作为内控。共检测位于AZFa区的sY84和sY86,位于AZFb区的sY124、sY127、sY128、sY133、sY134和sY143,位于 AZFc区的sY152、sY239、sY242、sY254和sY255,以及独立存在的sY82和sY145STS。2%琼脂糖凝聚电泳检测扩增结果,100V电压电泳80min,goodview显色,结果用Tanon4100凝胶成像系统观察并拍照。对AZF缺失者重复扩增3次以上确保结果准确。

1.2.3 无精症及少精症诊断标准 男性患者禁欲5~7d,连续3次精液常规检测(至少间隔3d)。且离心沉淀镜检均无精子为无精子症,精子密度<5×106/ml者为严重少精子症[2]。

2 结果

2.1 AZF缺失率

1700例特发性不育患者AZF总缺失率为6.6%(112/1700)。其中 AZFc缺失率为 4.5%(76/1700);AZFb+c+sY145 为 1.2% (20/1700);AZFa 为0.3%(5/1700)、AZFa+b+c 为0.3%(5/1700);AZFb+c为0.2%(3/1700);AZFb+c和sY84(AZFa区)为0.1%(2/1700);AZFc和sY143(AZFb区)为0.1%(1/1700)。

2.2 AZF微缺失类型及其表型(表1)

3 讨论

染色体Yq11区微缺失是导致生精障碍的重要因素[3],对无精子症和重度少精子症患者进行AZF基因微缺失筛查已被欧洲男科学会推荐为常规检查项目。1976年,Tiepolo等[4]首次提出Y染色体长臂远端存在调控精子发生的基因,并把这一区域称为AZF。Vogt等[5]进一步将AZF划分为AZFa、AZFb和AZFc区。1999年Kent-First等[6]提出除了已报道的3个区域外,在AZFb和AZFc区之间也存在STS片段的丢失,有学者将这个区域命名为AZFd区,主要包括位点sY145,AZFd是否存在目前仍然存在争议,最新修订的欧洲男科指南将sY145单独列出。国内外研究表明不育男性AZF区的缺失率为1%~55%[7-8]。意大利男性不育患者中Y染色体微缺失率为5%,其中AZFc区缺失率为3.2%,AZFb+c区自由缺失率为0.6%[7]。而德国对无精子症和严重少精子症患者的研究表明,Y染色体微缺失率仅为1.8%,其中AZFc区缺失率为1.5%[9]。有报道,我国无精子症和严重少精子症患者AZF微缺失率约为11.5%,其中AZFc缺失率为6.1%,AZFb+c缺失率为1.3%,AZFa+b+c缺失率为0.1%[10]。本研究1700例特发性不育患者中AZF总缺失率为6.6%(112/1700),其中AZFc和AZFb+c+sY145缺失最为常见,发生率分别为4.5%(76/1700)和1.2%(20/1700),未发现AZFb单独缺失的患者。不同国家、地区Y染色体AZF微缺失发生率的变化与研究人群的地域和种族不同,以及研究群体的数量、入选标准、检测方法等不同有关,其中研究人群的构成为主要因素。

表1 112例特发性不育患者AZF微缺失构成及其表型

经过数年研究,Y染色体AZF微缺失的基因型与其表型的关系得到了部分证实,AZFa全缺失常表现为唯支持细胞综合征I型(SCOS),即无精原细胞,仅有支持细胞出现,同时有睾丸体积缩小[11]。AZFb缺失与无精子症或严重少精子症相关,病理表现为生精受阻,停滞在精母细胞阶段,睾丸内可见精原细胞和初级精母细胞,但无精子生成[12]。AZFc缺失有多种表型,精子计数可以从无到正常,但畸形精子明显增多,组织学类型可能随病理损害时间而不断发展,即随着时间的推移生精细胞的数量逐渐减少[12]。AZFb+c联合缺失表现为严重生精功能阻滞[13]。

本研究中AZFc缺失患者76例,其中35例为无精症,41例为严重少精子症;其它AZF微缺失类型均表现为无精症。AZFa、AZFb、AZFb+c缺失的患者表现为无精症,即使通过显微睾丸取精(TESE)也很难获得精子,AZFc缺失患者通过TESE获得精子的成功率可达75%[14],从而可以通过卵泡浆内单精注射助孕,生育下一代。AZFc缺失的患者精子数量随着时间推移进行性减少,故可以考虑冷冻精液备用。因此,在应用辅助生殖技术治疗之前对患者进行Y染色体AZF检测,可以明确部分患者精子生成障碍的原因,从而避免不必要的治疗,也可以预测辅助生育结局。

[1]Huynh T,Mollard R,Trounson A.Selected genetic factor associated with male infertility[J].Hum Reprod Update,2002,8:183-198.

[2]谷翊群,陈振文译.世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册[M].北京:人民卫生出版社,2011:57-58.

[3]Ferlin A,Arredi B,Foresta C.Genetic causes of male infertility[J].Reprod Toxicol,2006,22:33-141.

[4]Tiepolo L,Zuffardi O.Localization of factor controllin spermatogenesis in the nonfluorescent portion of the human chromosome long arm[J].Hum genet,1976,34:119-124.

[5]Vogt PH,Edelmann A,Kirsch S ,et al.Human Y chromoson azoospermia factor(AZF)mapped to different subregion in Yq11[J].Hum Mol GENET,1996,5:933-943.

[6]Kent-First M,Muallem A,Shultz J,et al.Defining regions of the Y-chromosome responsible female infertility and identification of a fourth AZF region (AZFd)by Y-chromosome microdeletion detection[J].Mol Reprod Dev,1999,53(1):27-41.

[7]Ferlin A,Arredi B,Speltra E.Molecular and clinical characterization of Y chromosome microdeletions in infertile men:A 10-year experience in Italy[J].Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism,2007,28:762-770.

[8]Imken L,Houate BE,Chafik A.AZF microdeletions and partial deletions of AZFc region on the Y chromosome in Moroccan men[J].Asian Journal of Andrology,2007,(5):674-678.

[9]Simoni M,Tüttelmann F,Gromoll J,et al.Clinical consequences ofmicrodeletions of the Y chromosome:the extended Münster experience[J].Reprod Biomed Online,2008,16(2):289-303.

[10]Fu L,Xiong DK,Ding XP,et al.Genetic screening for chromosomal abnormalities and Y chromosome microdeletions in Chinese infertile men[J].J Assist Reprod Genet,2012,29(6):521-527.

[11]Kamp C,Hirschmann P,Voss H,et al.Two long homologous retroviral sequence blocks in proximal Yqll cause AZFa microdeletions as a result of intrachromosomal recombination events[J].Hum Mol Genet,2000,9:2563-2572.

[12]Kent-First M,Muallem A,Shultz J,et al.Defining regions of the Y-chromosome responsible for male infertility and identification of a fourth AZF region (AZFd)by Y-chromosome microdeletion detection[J].Mol Reprod Dev,1999,53:27-41.

[13]Yang Y,Ma MY,Xiao CY,et al.Massive deletion in AZFb/b q-c and azoospermia with Sertoli cell only and/ormaturation arrest[J].IntJ Androl,2008,31:573-578.

[14]刘小红,闫丽盈,李蓉,等.Y染色体微缺失与辅助生殖技术关系的研究进展 [J].生殖与避孕,2013,33:43-45.

猜你喜欢

精症生精特发性
维生素D联合GnRHa在特发性性早熟患儿中的应用
剪切波弹性成像技术评估男性不育患者少弱精症程度的价值分析
弱精症男性精子SEMG1基因表达及对体外受精结局的影响
精杞胶囊对大鼠生精功能损伤的保护作用
特发性腹痛一例
生精胶囊改善雄性去势大鼠勃起功能的研究
生精细胞发育相关lncRNA的研究进展
高脂饮食诱导大鼠生精功能障碍
神经肌肉电刺激治疗特发性面神经麻痹
特发性矮小患儿血中p53及p21waf/cip1的表达