张卫云，任广立，伍令灿，孙朝晖，李林海

广州军区广州总医院a.检验科；b.儿科；广东 广州 510010

全球约有20 亿人曾感染过乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV），其中3.5亿人为慢性HBV感染者，几乎一半在中国。我国作为乙型肝炎的高感染区，严重威胁着人们的身体健康。急性乙肝中有20%会转为慢性，进而可能发展为肝硬化和肝癌。因此，准确、迅速的诊断对乙肝的疗效和预后极为重要。HBV对肝功能的损害机制非常复杂[1-2]，临床中常将外周血中HBV-DNA含量作为病毒复制活跃最可靠和直接的指标[3]，其高低能直接反映肝炎患者的病毒水平；而常常将血清中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）水平作为反映肝细胞功能的指标，因为通常此酶在肝细胞浆内含量最为丰富，当肝炎病毒损害肝细胞时其从胞浆内释放到血清中，使血清中的含量升高[4]。本研究探讨乙型肝炎患者血清中乙肝表面抗原（HBsAg）定量与HBV-DNA 定量及ALT 水平的相关性，旨在为进一步研究HBC 复制、感染性及临床抗病毒的治疗提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

收集广州军区广州总医院2014年10月至12月乙肝患者血清124 例，检测HBsAg、HBV-DNA 及ALT的血清水平。患者平均年龄为39.6±13.4岁，同时排除其他疾病的干扰。

1.2 研究方法

HBsAg 定量采用化学发光法检测，仪器为雅培公司的i-2000 全自动化学发光仪，试剂为原装配套试剂，操作过程严格按照SOP文件执行。HBV-DNA定量采用实时荧光定量PCR 法检测，仪器为美国Bio-Rad PCR 仪，试剂盒购于上海科华生物科技有限公司，血清HBV-DNA阳性（＞500拷贝/mL）作为病毒复制的标准。血清ALT 采用日立7600 全自动生化分析仪检测，试剂采用广州科方生物技术有限公司提供的试剂盒。

根据HBsAg 水平把乙肝患者分成3 组，即≤1000 IU/mL 组、1000～10 000 IU/mL 组和≥10 000 IU/mL 组。按照HBV-DNA 含量的高低分成4组，即≤500 拷贝/mL（Ⅰ级）组、500～104拷贝/ml（Ⅱ级）组、104～106拷贝/mL（Ⅲ级）组和≥106拷贝/ml（Ⅳ级）组。根据ALT 水平分成3 组，即≤40 U/L 组、41～100 U/L组和＞100 U/L组。

1.3 统计学方法

采用Excel软件建立数据库，应用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计学处理。差异性比较两组资料时采用t检验，多组采用χ2分析，相关分析采用Spearman。

2 结果

2.1 乙型肝炎患者HBsAg 定量与ALT 水平的相关分析

124例乙型肝炎患者HBsAg 定量与ALT水平的统计结果见表1。经检验，χ2=0.918＜9.49（χ20.05，4），P＞0.05，3 组不同HBsAg 水平的患者血清ALT 含量无显著性差异。经Spearman 秩相关检验，等级相关系数为0.117（P=0.195），说明患者血清HBsAg 水平与ALT含量无明显的相关关系。

2.2 乙型肝炎患者HBsAg 定量与HBV-DNA 含量的相关分析

124 例乙型肝炎患者HBsAg 定量与HBV-DNA含量的统计结果见表2。经检验，χ2=23.85＞22.46（χ20.001，6），P＜0.001,说明HBsAg 水平与患者血清HBV-DNA 含量有相关性。经Spearman 秩相关检验，等级相关系数为0.286（P＜0.01），表明乙肝患者血清HBsAg 水平与HBV-DNA 含量存在正相关关系，即HBsAg含量越高，HBV-DNA水平越高。

表1 124例HBV患者HBsAg定量与ALT水平分组结果

2.3 乙型肝炎患者HBV-DNA含量与ALT水平的相关分析

124 例乙型肝炎患者HBV-DNA 含量与ALT 水平的统计结果见表3。经检验，χ2=22.89＞22.46（χ20.001，6），P＜0.001，说明HBV-DNA含量与患者血清ALT 水平有相关性。经Spearman 秩相关检验，等级相关系数为0.387（P＜0.01），表明乙肝患者的血清HBV-DNA 含量与ALT 水平存在正相关关系，即HBV-DNA含量越高，ALT水平越高。

表2 124例HBV患者HBsAg定量与HBV-DNA含量分组结果

表3 124例HBV患者HBV-DNA含量与ALT水平分组结果

3 讨论

血清HBsAg、HBV-DNA 含量和ALT 水平都是反映乙肝患者肝功能的重要指标。HBsAg主要反映机体的乙肝感染状态；HBV-DNA 含量能直接而真实地体现机体内乙肝病毒复制程度和传染性；ALT主要存在于肝细胞浆中，是反映肝损害极为敏感的生化指标[5]，当大量肝实质细胞损伤时，肝细胞膜的通透性增大，使血清中的ALT水平显著升高，因此其血清水平的改变能反映肝损伤程度，同时也能反映机体对HBV的免疫强度。

本研究选取124 例HBsAg 定量检测阳性标本，检测其HBV-DNA 含量和ALT 水平，分析HBsAg 与HBV-DNA 和ALT 的相关性。研究发现，乙肝患者的血清HBsAg 水平与ALT 含量无明显的相关性，等级相关系数为0.117（P=0.195）；而HBsAg 与HBVDNA 含量存在正相关关系，等级相关系数为0.286（P＜0.01）；同时HBV-DNA 含量与ALT 存在正相关性，等级相关系数为0.387（P＜0.01）。乙肝患者的血清HBsAg 水平与ALT 含量的相关性不明显，可能与患者免疫状态存在差异或抗病毒治疗相关，因此单独用HBsAg 水平判定肝细胞的损害程度须慎重[6]。乙肝病毒进入被感染的肝细胞后立即在细胞中不同部位开始裂解复制，产生许多病毒“零件”：含有DNA 和酶类的核心，病毒的外壳。外壳有3 种颗粒形式，一是含有外膜和核衣壳的完整病毒粒子，称作Dane（丹氏）颗粒，直径45 nm；二是由空心包膜组成的球形颗粒，直径20 nm，其含量一般要超过Dane颗粒10 000～1 000 000倍；三是少量由空心包膜构成的管状颗粒，直径20 nm，断裂后可形成小球形颗粒[7]。3种病毒外壳颗粒都有共同的HBV表面抗原，外壳的数量总比核心的数量要多，过剩的病毒外壳释放到血液中，以小球形或管形颗粒的形式存在于血液中并随之循环，这些小颗粒就是在血清中检查到的表面抗原。由此可见，HBsAg 含量受HBVDNA 翻译为外壳蛋白质的量和肝脏组织释放乙肝病毒外壳的数量的影响，即与HBV-DNA 的含量有相关性，与本次研究相符。肝脏细胞不被破坏，同样可大量释放乙肝病毒外壳（即HBsAg），所以乙肝患者的血清HBsAg 水平与ALT 含量无明显的相关性。定量检测血清中的HBV-DNA含量主要来自两部分，一为肝细胞分泌的完整乙肝病毒，二为机体清除乙肝病毒的同时启动了宿主针对HBV 的免疫应答，造成肝细胞的破坏而释放的大量乙肝病毒，所以HBV-DNA 含量与ALT 水平存在相关性受机体的免疫状态影响。

由表1 可见，124 例HBsAg 定量阳性中HBVDNA定量阴性的有55例，占44%，这表明虽然HBVDNA 定量检测提示病毒复制已得到抑制，但它不足以反映表面抗原的清除[8]。HBV-DNA 阴性时肝功能正常可以说明病情处于较为稳定的阶段，表示乙肝病毒复制不活跃，处于低复制或不复制的状态。另外，由于肝脏组织中的乙肝病毒每时每刻释放到血液中的数量都在变化之中，每天检测血液中的乙肝病毒核酸含量也不尽相同。其次，HBV-DNA 的定量采用了实时荧光PCR 检测法，最低检测限只有500 拷贝/mL，如果服用抗病毒药物，可抑制HBVDNA 的复制，而由于HBV-DNA 整合到肝细胞基因组中，不影响其翻译蛋白质外壳，使血清中HBVDNA含量小于500拷贝/mL，同样导致HBsAg定量阳性而HBV-DNA 阴性的结果。有文献报道，HBV 基因的S区发生有意义的点突变或插入、缺失突变，亦可导致PCR结果阴性[9]。

[1]陈兆军,张腊红,朱明利,等.多色荧光PCR 法检测HBV 耐药位点突变[J].中华实验和临床病毒学杂志,2010,24(6):473-475.

[2]李伟,宋秀军,陈舒,等.HBV-DNA与血清标记物及ALT之间的关系[J].中华疾病控制杂志,2010,14(11):1167-1168.

[3]贺岩,罗梅,孙艳艳.HBV DNA 载量与HBsAg、HBeAg 和HBs Ab ALT 水平的相关性[J].国际检验医学杂志,2012,33(19):2400-2401.

[4]胡旭,刘红霞,任东方.乙型肝炎病毒感染患者的联合检测临床意义[J].中华医院感染学杂志,2014,24(15):3890-3892.

[5]王元,朱亚洲,种莹,等.乙肝患者血清的HBV-DNA 含量与ALT 水平的关系研究[J].现代生物医学进展,2014,14(29):5735-5737.

[6]曹军皓,黄前川.乙型肝炎病毒外膜大蛋白与病毒复制及肝脏受损的相关性[J].现代检验医学杂志,2012,27(3):148-150.

[7]裴彦祯,韩涛,马晓艳,等.HBsAg及HBV DNA定量水平在慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中的变化[J].中华肝脏病杂志,2014,10(3):743-746.

[8]黄洁,吴建华.乙型肝炎病毒血清标志物与HBV-DNA 关系探讨[J].分子诊断与治疗杂志,2014,6(2):113-116.

[9]伍敏仪,陈琳幕,黎庆梅,等.血清HBV-DNA 与HBV 标志物定量关系的探讨[J].临床医学工程,2011,18(8):1248-1249.