张志涛 刘蕾 邵华

（1.山东省职业卫生与职业病防治研究院，山东济南 250062；

2.济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院，山东济南 250062；

3.山东农业工程学院，山东济南 250062）

尿液中甲苯二异氰酸酯及其代谢产物的高效液相色谱法测定

张志涛1，2刘蕾3邵华1

（1.山东省职业卫生与职业病防治研究院，山东济南 250062；

2.济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院，山东济南 250062；

3.山东农业工程学院，山东济南 250062）

用高效液相色谱法直接测定尿液中的甲苯二胺和甲苯二异氰酸酯，有效评价TDI在体内的代谢及残留。该方法操作简便、快捷，无需特殊试剂和设备。

高效液相色谱；甲苯二胺；甲苯二异氰酸酯；

甲苯二异氰酸酯（Toluene diisocyanate，TDI）应用非常广泛，在高浓度TDI环境中暴露，对接触粘膜有刺激性，可引起哮喘，进而可致癌【1】。有实验证明尿中TDA含量受环境中TDI暴露浓度高低的影响，二者存在着明显的剂量反应关系。TDI在体内的代谢产物为甲苯二胺（Diaminotoluene，TDA）【2】，可作为研究职业接触TDI尿中的生物标志物。用TDA作为生物标志物多用在检测车间空气中TDI的方法中【3】，但也有人担心会有少量游离TDI未被降解直接排入尿中的可能，故本法使用高效液相色谱法对尿液标本中的TDA及可能存在的TDI进行测定。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：Aglient 1260高效液相色谱仪，配有G1329B自动进样器，G1316A柱温箱，G1315D二极管阵列（DAD）检测器等；色谱柱：ZORBAX SB-C18柱，4.6×150mm 5μm。津腾抽真空过滤系统。

试剂：pH为7.0的三乙胺磷酸缓冲溶液、色谱纯乙腈、甲醇；2，6-TDI标准物质（TCI公司）；2，4-TDI标准物质（Fluka公司）；2，4-TDA标准物质（东京TRC公司）；2，6-TDA（东京TRC公司）。

1.2 实验条件

流速：1.0mL·min-1

进样量：5μL

二极管阵列扫描，选择最优波长

柱温箱：30℃

1.3 标准溶液制备：

（1）2，4-TDA标准储备液：精密称取0.0537g的2，4-TDA，用色谱甲醇溶解并定容至50mL，制得标准溶液浓度为1.074mg·mL-1。

（2）2，6-TDA标准储备液：精密称取0.0582g的2，6-TDA，用色谱甲醇溶解并定容至50mL，制得标准溶液浓度为1.164 mg·mL-1。

（3）2，4-TDI标准储备液：精密称取0.0657g的2，4-TDI，用色谱甲醇溶解并定容至50mL，制得标准溶液浓度为1.314 mg·mL-1。

（4）2，6-TDI标准储备液：精密称取0.0653g的2，6-TDI，用色谱甲醇溶解并定容至50mL，制得标准溶液浓度为1.306 mg· mL-1。

图1

（5）2，4-TDA、2，6-TDA、2，4-TDI和2，6-TDI混标：分别量取上述四种标准液5.00mL，置于同一容量瓶中，用色谱甲醇稀释并定容于50mL，制得混标浓度分别为：107.1μg·mL-1、116.4μg· mL-1、131.4μg·mL-1和130.6μg·mL-1。

1.4 标准系列的制备

按照WST 68-1996《研制生物样品监测检验方法指南》的要求准备好收集的尿液，经0.22μm滤膜过滤，于10000r·min-1离心后备用。

准确吸取取混合标准溶液0，1，2，3，5mL，用处理好的尿液稀释并定容至50mL.制成标准系列浓度见表1.

表1

1.5 测定

采集的尿液样品于10000r·min-1离心后，用三乙胺缓冲液和乙腈做流动相，根据TDA和TDI的化学性质优化HPLC流动相梯度条件对离心后的尿样进行测定。

2 结果与讨论

2.1 对同一基体中的四种成分定性，根据保留时间用单组份标准溶液确定混合标准液的色谱峰，根据出峰顺序，分别为2，6-TDA，2，4-TDA，2，6-TDI，2，4-TDI。见图1

2.2 运用3D光谱图（见图2）发现从190nm—400nm的DAD的响应值逐渐减弱，在234nm时，灵敏度最佳，但由于干扰峰也相应增多，故选择更为理想的240nm波长作为检测波长。见图2

图2

2.3 标准曲线、检出限测定方法指南要求色谱法做3个点的标准曲线，本方法加了一个高浓度，做4个点标准曲线，并按回归方程作出标准曲线；以3倍的噪声水平与回归方程斜率的比值作为检出限。见表2

表2

甲苯二胺和甲苯二异氰酸酯在2-10μg/mL的范围里均有良好的线性关系。

2.4 精密度取标准曲线的3种浓度测定。由表3结果可知，4种成分3种浓度的相对标准偏差（RSD）在1.1%-4.9%（要求控制在5%以内）。

表3

2.5 回收率测定在对已知含量的样品中加入3种浓度的标准溶液，进行回收试验，其平均回收率为96.1%-102.3%（价表回收率要求95%-105%）。

3 结语

在实验室配备高效液相色谱仪常规仪器及配件的前提下，本方法通过简单的前处理过程，能对TDA和TDI的进行定性及定量检测，由于两种物质的同分异构体能够完全分离，故可以达到同时对四种不同结构同时检测的效果。

［1］Pernilla Lind et al.Toxicokinetics of 2，4-and，6-toluene⁃diamine inhydrolysed urine and plasma after occupational exposure to 2，4-and 2，6-toluene diisocyanate.Occupational and Environ⁃mental Medicine 1996；53：94-99.

［2］Katja Kääriä et al.Exposure to 2，4-and 2，6-toluene diiso⁃cyanate（TDI）during production of flexible foam：determination of airborne TDI and urinary 2，4-and 2，6-toluenediamine（TDA）.The Analyst 2001，Vol.126（7），pp.1025-31.

［3］管健，吴小琼，朱国英等GC-MS法测定车间空气中甲苯二异氰酸酯探讨［J］中国卫生检验杂志，2010，20（5）：998-1000.

Determination of TDA and TDI in urine by high performance liquid chromatograph.This method is simple，rapid and need not Special reagent and equipment.

High performance liquid chromatography；TDA；TDI

张志涛（1979—），男，山东省医学科学院基础医学研究所助理研究员，本科。

邵华