徐 凯，张伟国

（江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122）

原生质体融合选育耐高温柠檬酸生产菌

徐 凯，张伟国

（江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122）

为获得耐高温柠檬酸生产菌，利用原生质体融合技术将具有优良性状的高产菌株W和耐高温柠檬酸生产菌Y-711进行融合，筛选耐高温的高产柠檬酸生产菌。通过变色圈筛选得到融合株R502，在40℃培养72 h就可产酸118.7 g/L，其产酸量比亲本菌株分别高10.5%和21.0%，培养时间分别减少14.3%和7.7%，该菌株遗传稳定。原生质体融合是一种有效获得耐高温柠檬酸生产菌的方法。

原生质体融合；黑曲霉；耐高温柠檬酸生产菌株

柠檬酸，又名枸橼酸，是生物体主要的代谢产物之一，被广泛应用于食品、医药和化工等行业中［1］。近年来，柠檬酸的需求量越来越大，因此，选育优良性状的柠檬酸生产菌株备受重视。当前柠檬酸生产用菌株多为不耐高温菌株，发酵生产过程中需要大量冷却水控制发酵温度，从而使生产成本居高不下。据武国庆等［2］测算，300 m3发酵罐的发酵温度每升高1℃，则每吨柠檬酸至少减少循环冷却水量15.2 t。耐高温柠檬酸生产菌生长快、代谢活力高、发酵周期短，有利于提高设备利用率，减少冷却水用量，降低生产成本。但是，目前国内外对柠檬酸生产菌株的研究多集中于利用物理、化学方法提高产量，忽略了对耐高温菌株的研究，所以对其开展研究有一定的实际意义。

原生质体融合是20世纪50年代发展起来的一项重要的基因重组技术［3-4］，灭活原生质体融合技术则是原生质体融合技术的一个重要发展［5］。……