林雪霞

（邢台医学高等专科学校校办室，河北邢台054000）

高效液相色谱法测定参肤软膏中盐酸小檗碱含量

林雪霞

（邢台医学高等专科学校校办室，河北邢台054000）

目的建立测定参肤软膏中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为0.1%磷酸（每100mL加入十二烷基磺酸钠0.02 g）-乙腈（59∶41），流速为1.0mL/min，检测波长320 nm，柱温室温，进样量20μL。结果盐酸小檗碱与其他组分分离良好，进样量在1.184～5.920μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 4，n=5）；平均加样回收率为99.83%，RSD为0.30%（n=6）。结论该法简单、专属性强、重复性好，可用于参肤软膏中盐酸小檗碱的含量测定。

参肤软膏；高效液相色谱法；盐酸小檗碱；含量测定

参肤软膏由苦参、地肤子、黄柏、黄精等中药加工制成，作为外用制剂，具有清洁、保护皮肤，祛湿收敛，清热，解毒，杀虫止痒和较强的杀灭真菌的作用。方中黄柏具有清热燥湿、泻火解毒、退虚热及消肿祛腐的作用［1］，其主要有效成分小檗碱具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗溃疡及免疫抑制作用［2-4］。方中盐酸小檗碱的含量与制剂的功效有密切的关系，故以高效液相色谱（HPLC）法测定其含量，为评价参肤软膏质量提供参考。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（日本岛津公司）：LC-20AT型二元高压梯度泵，SPD-M20A型紫外检测器，LC-solution工作软件；电子恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）；R200D型电子分析天平（德国Sartorius公司）。盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110713-200910）；参肤软膏（河北国金药业有限责任公司，批号为20130801，20130802，20130803）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件和系统适用性试验［5-7］

色谱柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：0.1%磷酸（每100 mL加入十二烷基磺酸钠0.02 g）-乙腈（59∶41）；流速：1.0 mL/min；检测波长：320 nm；柱温：室温；进样量：20μL。分离度大于1.5，拖尾因子符合要求，理论板数按盐酸小檗碱峰计不低于3 000。

2.2 溶液的制备

称取盐酸小檗碱对照品7.40mg，精密称定，置25mL容量瓶中，加流动相溶解，并定容至25 mL，摇匀，配制成质量浓度为0.296 0 g/L的对照品溶液。称取参肤软膏样品0.10 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入1%盐酸甲醇25mL，密塞，精密称定质量，于水浴上加热回流30min，取出，放冷，再精密称定质量，用1%盐酸甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，续滤液过0.45μm微孔滤膜滤，得供试品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：按处方及制备工艺制备不含黄柏药材的阴性样品，按供试品溶液制备阴性对照品溶液。按拟订色谱条件，精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪中测定。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照品溶液则无此峰，表明处方中其他药材不干扰盐酸小檗碱的含量。色谱图见图1。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5mL，分别置5 mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，质量浓度分别为0.059 2，0.118 4，0.177 6，0.236 8，0.296 0 g/L，精密吸取各质量浓度对照品溶液20μL，按拟订色谱条件测定，以质量浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得回归方程Y= 7.067X×107+1.009×105，r=0.9994（n=5）。结果表明，盐酸小檗碱进样量在1.184～5.920μg范围内与峰面积线性良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，按拟订色谱条件连续进样5次，记录峰面积。结果的RSD=0.55%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液20μL，分别于0，1，2，4，8 h时测定。结果的RSD为0.10%（n=5），说明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验：精密称取同一样品（批号为20130801），依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定盐酸小檗碱含量。结果的RSD为0.49%（n=5），表明方法重复性好。

加样回收试验：精密称定，称取已知含量同一批样品（批号为20130803，质量浓度为39.48mg/g）约0.05 g，精密称定，共6份，分别置圆底烧瓶中。另取对照品溶液（0.296 0mg/mL），精密量取4，5，6mL各2份，分别加入上述圆底烧瓶中，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品依法制备成试品溶液，按拟订色谱条件测定。结果批号为20130801，20130802，20130803样品中盐酸小擘碱平均含量分别为39.69，41.03，40.05mg/g。

3 讨论

黄柏为方中要药，其活性成分盐酸小檗碱具有多种药理活性，与本方功能主治一致，因此以盐酸小檗碱的含量测定作为本组方的质量指标是合理的。盐酸小檗碱的含量测定方法较多，曾参考文献［8-13］选择0.1%磷酸（每100 mL流动相溶液加0.1 g十二烷基磺酸钠）-乙腈（50∶50）进行试验，结果盐酸小檗碱色谱峰与相邻峰未达到最佳分离，通过调节流动相，0.1%磷酸（每100 mL磷酸溶液加0.02 g十二烷基磺酸钠）-乙腈（59∶41），盐酸小檗碱与其他组分得到较好的分离，且峰形对称。

以1%盐酸甲醇溶液和甲醇为溶剂，以不同的加入量进行试验，再以不同的提取方法（超声波提取和回流提取）制备供试品溶液，结果表明1%盐酸甲醇溶液25mL回流提取的含量最高，故选择此方法提取。提取时间分别考察提取15，30，45，60 min，结果15 min不能完全提取，30 min和45 min的结果基本相同，而60 min时比45 min略低，故选择提取30 min。HPLC法样品处理简单，回收率高，重复性好，可以用于测定方中盐酸小檗碱的含量。

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Content Determination of Berberine Hydrochloride in Shenfu Ointments by HPLC

Lin Xuexia
（Office of the Principal，Xingtai College of Medicine，Xingtai，Hebei，China 054000）

Objective To establish a content determination method of berberine hydrochloride in Shenfu Ointments.Methods HPLC analysis was carried out on a Kromsal C18chromatographic column（250 mm×4.6 mm，5μm），the mobile phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid（59∶41）（adding 0.02 g sodium dode-cylsulphate into 100 mL solution）with the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength was 320 nm；the temperature of column was room temperature，and the injection volume was 20μL. Results The linear range was 1.184-5.920μg with good correlation with the peak area（r=0.999 4，n=5）.The average recovery was 99.83%and RSD was 0.30%（n=6）.Conclusion The established method is accurate，specific and reproducible，and suitable for the determination of berberine hydrochloride in Shenfu ointments.

Shenfu Ointments；HPLC；berberine hydrochloride；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0124-02

2015-01-27；

2015-07-07）