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牦牛CAV-3基因的克隆及其在牦牛和黄牛组织的表达分析

2015-10-24赵娟花裴杰梁春年郭宪吴晓云张良斌阎萍

生物技术通报 2015年5期
关键词:分析

赵娟花 裴杰 梁春年 郭宪 吴晓云 张良斌 阎萍

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 甘肃省牦牛繁育工程重点实验室,兰州 730050)

牦牛CAV-3基因的克隆及其在牦牛和黄牛组织的表达分析

赵娟花 裴杰 梁春年 郭宪 吴晓云 张良斌 阎萍

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃省牦牛繁育工程重点实验室,兰州730050)

旨在对牦牛CAV-3基因进行克隆、生物信息学分析,并对其在牦牛组织中的表达规律进行初步研究。根据GenBank数据库中已知的黄牛CAV-3基因的mRNA序列并设计特异性引物,应用RT-PCR技术克隆牦牛CAV-3基因的编码区。运用生物信息学方法,分析并预测牦牛Caveolin-3蛋白的理化性质、疏水性、蛋白结构域以及蛋白质二级结构。通过半定量PCR技术检测CAV-3基因mRNA在牦牛和黄牛各组织中的表达;利用实时荧光定量PCR技术检测牦牛和黄牛肌肉组织中CAV-3基因 mRNA表达水平。牦牛CAV-3的编码区全长631 bp,共编码151个氨基酸。CAV-3在牦牛肺、脾脏、肾脏、肝脏、卵巢组织中均不表达,仅在心脏和肌肉组织中表达,且在心脏组织的表达水平高于肌肉组织,CAV-3基因在黄牛各组织中的表达结果与牦牛一致。CAV-3基因在牦牛肌肉中的表达低于黄牛肌肉组织,但差异不显著(P>0.05)。

牦牛;Caveolin-3;克隆;表达分析

小窝(caveolae),又称胞膜窖,是细胞膜上直径为50-100 nm左右的囊泡凹陷结构,广泛存在于多种类型细胞膜上。在上皮细胞、脂肪细胞和肌肉细胞的质膜中含量较为丰富[1,2]。小窝蛋白(Caveolin),又称窖蛋白,是构成小窝基本组分的一类标志蛋白[3,4],其分子量在21-24 kD之间。……

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