张桂涛　阳　勇　李庆昌　何　凯　韩为跃

（广东联康生物与医药研究院，广东 东莞 523581）

紫外法测定重组人红细胞生成素（Fc）融合蛋白的含量

张桂涛阳勇李庆昌何凯韩为跃

（广东联康生物与医药研究院，广东 东莞 523581）

目的 建立紫外法测定重组人红细胞生成素（Fc）融合蛋白（rhEPO-Fc）含量的方法。方法 利用Edelhoch法测定rhEPO-Fc的摩尔消光系数，计算得到其溶液百分比消光系数，并测定rhEPO-Fc溶液A280值，依据公式c=A/ε计算rhEPO-Fc的含量。结果 rhEPO-Fc溶液百分比消光系数为1.3，在0.02～1.28 mg/mL浓度范围内，测定含量结果偏差＜4%。结论 该方法操作简便、专属性强、结果准确可靠，可用于rhEPO-Fc含量测定。

消光系数；红细胞生成素；融合蛋白

蛋白质定量是重组蛋白药物研究开发中最基本的实验内容，常用的定量方法包括Bradford、Lowry和HPLC法等，这些方法需要对应的标准品，而重组蛋白的标准品一般情况下无法获取，以前多采用牛血清白蛋白或者人血清白蛋白作为替代标准品用于重组蛋白的含量测定，但不同蛋白质的氨基酸组成不同，其理化性质不同，因此用非同质标准品测定蛋白含量偏差比较大，不能准确反映待测蛋白的真实含量。近年来，紫外吸光法已成为FDA、EMA推荐的重组蛋白药物含量测定方法之一。在摩尔消光系数及相对分子质量已知的情况下，仅需要测定样品的光吸收值，即可计算出蛋白浓度，而不需要蛋白标准品。

目前已知的摩尔消光系数的测定有几种方法，包括dry weight［1］、nitrogen determination［2］和spectral method［3］，这几种方法都存在蛋白质用量大、过程繁琐等缺点，限制了它们在实验室的使用。……