李强 高聚林 苏二虎 廉博 牛敏 邵志壮 谢田

摘要 [目的] 优化大豆CDDP-PCR反应体系。[方法]采用单因素试验方法对影响大豆CDDPPCR反应的Mg²⁺浓度、Taq DNA 聚合酶用量、引物浓度、dNTPs浓度和模板DNA用量等因素进行优化。[结果]优化后的大豆CDDPPCR体系为：Mg²⁺浓度2.0 mmol/L、Taq聚合酶用量1.5 U、引物浓度0.375 μmol/L、dNTPs浓度0.3 mmol/L、DNA模板用量40 ng。运用24个大豆品种验证了该反应体系稳定、可靠。[结论]该反应体系的建立为大豆种质遗传多样性分析、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种奠定了基础。

关键词 大豆;CDDP;单因素试验;体系优化

中图分类号 S565.1  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2015）03-032-03

Optimization of CDDPPCR System by Single factor Experiment Design in Soybean

LI Qiang¹， GAO Julin²， SU Erhu¹et al

（1.Inner Mongolia Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences， Huhhot， Inner 010031;2. College of Agronomy， Inner Mongolia Agricultural University， Huhhot， Inner 010019）

Abstract [Objective] The aim was to optimize CDDPPCR system by single factor experiment design in soybean. [Method] Single factor experiment design were applied to optimize CDDPPCR amplification system of soybean in five factors such as Mg²⁺， Taq DNA polymerase， primer， dNTPs and template DNA. [Result]The suitable reaction system was obtained， that is 20 μl containing 2.0 mmol/L Mg²⁺， 1.5 U Taq polymerase， 0.375 μmol/L primer， 0.3 mmol/L dNTPs， 40ng DNA template. The optimized CDDPPCR system was tested on 24 soybeans， and the result was stable and reliable. [Conclusion]The system provides the basis for evaluation of genetic diversity， construction of genetic linkage map and molecular marker assisted breeding for the soybean.

Key words Soybean; CDDP; Single factor experiment; System Optimization

基金項目 内蒙古自治区科技创新引导奖励资金项目（20111707）;内蒙古农牧业科学院青年创新基金项目（2014QNJJN01）。

作者简介 李强（1982- ），男，内蒙古巴彦淖尔人，助理研究员，博士，从事大豆育种、栽培研究。

*通讯作者，研究员，从大豆育种、栽培研究。

收稿日期 20141215

大豆是世界上重要的粮食、油料、饲料兼用作物，是人类食用油和植物蛋白的主要来源^[1]。大豆起源于我国，具有悠久的栽培历史，经过长期自然与人工选择，产生了丰富的遗传变异类型。但品种退化、品种混乱严重给种质区分和大豆育种工作带来了诸多困难，而分子标记技术可有效地进行品种鉴定、遗传多样性研究，并能指导育种实践^[2]。前人已先后应用RAPD^[3]、AFLP^[4]、SSR^[5]、ISSR^[6]、SRAP^[7]等分子标记技术对大豆种质遗传多样性、亲缘关系鉴定及杂交后代鉴定等方面进行了研究。但这些标记技术都是传统意义上的随机DNA分子标记，随着植物基因组学和大规模测序技……