金莹 房保海 刘新亮 孙涛 贾俊涛 赵丽青 孙雯娴

摘要  [目的] 建立一种通过焦磷酸测序技术检测大豆过敏原成分的方法。[方法]针对大豆GlymBd30K基因设计特异性PCR引物和焦磷酸测序引物，利用设计的特异性引物扩增各测试材料的特异基因片段并进行焦磷酸测序。 [结果]该检测方法对大豆过敏原成分具有非常好的重现性和特异性，测序结果在GenBank中进行同源性比对分析，表明目标序列能够作为鉴定GlymBd 30K基因很好的序列。[结论]为食品中的大豆过敏原成分快速检测提供很好的技术支撑。

关键词 焦磷酸测序;大豆;过敏原;PCR

中图分类号 S188  文献标识码

A  文章编号 0517-6611（2015）03-029-03

The Detection of Allergen GlymBd 30K in Soybean by Pyrosequencing Technology

JIN Ying¹， FANG Baohai2*， LIU Xinliang³et al

（1.Huangdao Exit & Entry Inspection and Quarantine Bureau， Qingdao， Shandong  266555; 2.Inspection and Quarantine Technical Center of Shandong Exit & Entry Inspection and Quarantine Bureau， Qingdao， Shandong  266002; 3. Heilongjiang Exit & Entry Inspection and Quarantine Bureau， Haerbin， Heilongjiang  150001）

Abstract  [Objective]To establish a rapid method to detect soybean allergens by pyrosequencing technology. [Method] The conserved sequences for GlymBd30K gene specific PCR amplification， and then using pyrosequencing technology for PCR amplification products.Using primers design specific gene fragments in tested materials were amplified， and then pyrosequencing. [Result] The results had very good reproducibility; the sequencing results were homology found in GenBank. The target sequence to sequence as the identification of GlymBd 30K gene was very good.[Conclusions] A simultaneous quantitative detection of 96 samples by pyrosequencing rapid detection methods was Successfully established， it will provide good technical support for rapid detection of allergens for export soybeans and their products.

Key words  Prosequencing;Soybean;Allergen; PCR

基金項目 国家质检总局项目（2011IK221）。

作者简介 金莹 （1981- ），女，山东沂水人，农艺师，博士，从事食品安全方面的研究。*通讯作者，高级工程师，博士，从事食品安全检测技术研究。

收稿日期 20141211

大豆是一种常见的食品过敏原，被称为八大类食品过敏原之一，美国、欧盟等都要求在食品标签中强制性标识。大豆GlymBd 30K蛋白是大豆的主要过敏蛋白，也被称为P34蛋白或30K，广泛存在于所有大豆品种中。研究表明，65%的大豆过敏症状都是由GlymBd 30K蛋白引起的，因此GlymBd 30K蛋白被视为大豆蛋白中一个重要的免疫显性过敏原^[1-3]。早在1998年Takano就在NCBI数据库中提交了大豆GlymBd 30K的DNA序列（AB013289），而2006年研究者^[4]在NCBI的核酸数据库中提交了大豆GlymBd 30K的mRNA序列（DQ324851）。目前，已有研究建立了ELISA 法、 PCR 法等方法检测过敏原大豆成分，然而这些方法存在一些不足之处，如蛋白质耐热性差，不适宜于现场快速检测等缺点。……