董杰

1 酶联免疫吸附试验

抗原采用猪囊尾蚴的囊液，经亲和层析纯化、浓缩、分装后，于-20℃保存，使用前，用0.1M pH值9.6醋酸盐缓冲液稀释，使蛋白含量为30毫克/分升.酶结合物用兔抗猪IgG免疫血清，经硫酸铵盐析沉淀，再经DEAE-纤维素纯化提取免疫抗猪IgG抗体，用辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG，经酶活力测定，应用时最适稀释浓度为1∶1000。

操作方法为，以40孔聚苯乙烯微量反应为固相载体，每凹孔加稀释抗原液0.2毫升，置于4℃冰箱过夜，或30℃2小时，用pH值7.4PBS-吐温20洗涤3次，每次3分钟，抽干，加以PBS-吐温20稀释的被检血清0.2毫升，同份血清同同时试验2孔，置于37℃水浴箱孵育30分钟，同前洗涤，加1∶1000稀释的酶结合物0.2毫升，37℃水浴箱孵育30分钟，同前洗涤，加底物过氧化氢-邻苯二胺溶液0.2毫升，37℃15分钟后加2M硫酸0.05毫升终止反应。之后，将微量反应板移入酶标记光度计内，于492纳米波长测定光密度（OD值），每次试验均设置阳性阴性参考血清和PBS-吐温20空白对照。以参考阳性血清的OD值作0.1.待测血清的OD值大于或等于阳性参考血清的OD值时为阳性，低于此值为阴性。阳性猪反应液呈鲜明的橙黄色，阴性猪反应液呈浅的淡黄色，两者眼观对比有明显差别，易于判定。经反复试验，选定抗原的稀释度为30微克/毫升，血清稀释度为1∶50。

间接血凝集试验是一种敏感度很高的血清学试验，在猪囊尾蚴病的诊断上取得了很好的效果。从新鲜的猪囊尾蚴猪肉剥离整个虫体，吸取囊液混合后离心沉淀，取上清液即为囊尾蚴液抗原。用2.5%戊二醛处理过的……