方勇

摘要：目的： 探讨Zebularine对人肝癌细胞RASSFIA基因启动子甲基化以及mRNA表达的影响。方法： 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721，分别用0.5、1.0、 2.0、5.0μmol/L的Zebularine与之孵育72h。甲基化特异性PCR检测处理前后RASSFIA基因启动子甲基化水平。RT-PCR检测RASSF1A mRNA表达。结果 ： 随着药物浓度的增加，甲基化RASSFIA含量逐渐降低。而非甲基化产物逐渐增高。此外，Zebularine处理后，RASSF1A mRNA的含量也随之增高。结论： Zebularine可逆转SMMC-7721细胞株细胞中基因甲基化修饰状态。

关键词： Zebularine；肝癌细胞；RASSFIA基因；启动子甲基化

基金项目：湖南省自然科学衡阳联合基金（No.12JJ9033）；湖南省科技厅项目（No.2013SK3118、2014SK3081）；湖南省高校创新平台基金（No.10K052、12K094、13K083）；衡阳市科技局项目（No.2013KJ12、2013KJ28）

肝癌（liver cancer）是消化系统最常见的恶性肿瘤[1， 2]。虽然手术疗法是治疗肝癌的主要方式，但对于已转移至肝内或者肝外的肿瘤，迄今为止尚无理想的治疗方法[3， 4]。因此，寻求有效的的分子治疗靶点，从源头抑制肝癌的发生，是临床工作者不懈的追求。近年来，DNA异常甲基化在肿瘤的发生发展中的作用日益受到重视[5， 6]。RAS相关区域家族1A 基因（RASSF1A） 是一种新型的抑癌基因，位于人體3号染色体短臂。RASSFlA不仅和细胞调亡有关，同时也调控微管以及有丝分裂过程，并参与肿瘤的发生、发展。在多种肿瘤组织中，RASSF1A基因的表达降低或缺如[7]。这些研究结果表明RASSF1A是一种抑癌基因，RASSF1A的表达或者缺失可能是肿瘤发生的早期事件[8]。

Zebularine[1-（ B-D-呋喃核糖苷） -1，2-二氢嘧啶-2-酮]是一种新型的DNA 甲基转移酶（ DNA methyltransferase，DNMT） 抑制剂，可抑制后者甲基化作用从而对多种肿瘤具有抑制作用。本研究旨在观察Zebularine对肝癌细胞RASSF1A基因表达的影响。

1.材料与方法