邱萍，冯煦，单宇，印敏，赵友谊，王鸣，王奇志

（江苏省中国科学院植物研究所，江苏省药用植物研究开发中心，江苏南京210014）

分光光度法测定碱蓬中总黄酮、总皂苷的含量

邱萍，冯煦，单宇，印敏，赵友谊，王鸣，王奇志*

（江苏省中国科学院植物研究所，江苏省药用植物研究开发中心，江苏南京210014）

考察不同处理方法下碱蓬中总黄酮、总皂苷的含量。分别以芦丁、齐墩果酸为对照品，用紫外分光光度法对碱蓬中总黄酮、总皂苷的含量进行测定分析。结果表明，三种不同处理方法所得的碱蓬三个部位，总黄酮含量均大于20%，其中，碱蓬经纯水提取后，浓缩液过聚酰胺柱，60%乙醇洗脱部位总黄酮含量最高为36.51%，而碱蓬80%乙醇提取后，浓缩液过聚酰胺柱，60%乙醇洗脱部位总黄酮含量最低为22.66%。碱蓬80%乙醇提取后，浓缩液依次经石油醚、乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取部位总皂苷含量最高为13.18%，其它两种处理方法所测的总皂苷含量均在7%左右。不同处理方法对碱蓬中总黄酮、总皂苷含量有一定影响。

碱蓬；紫外分光光度法；化学成分；总黄酮；总皂苷

碱蓬Suaeda glauce（Bge.）Bge.为藜科Chenopodiaceae碱蓬属Suaeda Forsk.ex Scop.一年生草本真盐植物。主要分布于新疆、山东、河北、辽宁、吉林、内蒙古及甘肃等地的盐碱荒漠和沿海滩涂［1］。它是目前改良和绿化盐碱土壤的首选物种，又是沿海潮间带的先锋植物，资源相当丰富。研究发现，碱蓬中含有丰富的营养物质和药用成分，目前已逐渐发展成为药食两用的佳品。碱蓬种子和茎叶中营养成分完整而丰富，其种子脂肪含量占干物质的36.5%高于大豆，不饱和脂肪酸占90%、亚油酸占70%、亚麻酸占6.08%；鲜嫩茎叶的蛋白质含量占干物质的40%；并含有丰富的维生素和微量元素，其钙、磷、铁、核黄素含量高于菠菜、番茄、胡萝卜等蔬菜；维生素含量远高于螺旋藻，含硒量较一般植物高10倍左右；碱蓬种子和茎叶的蛋白质中人体必需氨基酸含量与世界卫生组织给出的完全蛋白质指标相当接近，优于螺旋藻、大豆以及鸡蛋中氨基酸的组成［2］。可见，其食用、保健、药用价值非常大。

黄酮类化合物是一类广泛存在于植物体内的天然产物，研究表明，具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等生理和药理活性［3-5］。皂苷是很强的表面活性剂，对心脏有刺激作用；又是很强的溶血剂，有些皂苷还具有抗菌、解热、镇静、抗癌［6］等有价值的生物活性。在过去的研究中证明碱蓬中含有丰富的黄酮类化合物，而所含的皂苷类化合物目前研究较少，本文用紫外分光光度法［7］对不同处理条件下的碱蓬总黄酮［8］、总皂苷进行测定。

1材料与仪器

碱蓬：2013年8月购自山东省寿光市，经江苏省中国科学院植物研究所袁昌齐研究员鉴定为碱蓬（Suaeda glauce），标本现存放于江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究开发中心，编号SG201308。

UV-2501PC：岛晶；STANO-BY分析天平：Shi madzu；HH-S型水浴锅：巩义市英峪予华仪器厂；GZX-9070 MBE数据鼓风干燥箱：上海博迅实业有限公司医疗设备厂；KH5200DB型数控超声波清洗器：昆山禾创超声仪器有限公司；架盘天平：江苏常熟衡器厂；Heating Bath B-491旋转蒸发仪、Vacuum Pump V-700：（BUCHI）。

2方法

2.1 碱蓬供试品的制备

1）1 kg碱蓬地上部分干药材加10倍量（料液比= 1 kg/10 L）的纯水加热回流提取3次，提取时间分别是3、2、2 h，合并3次提取液并浓缩至小体积；上样于聚酰胺柱，先用纯水洗脱除盐，再用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，浓缩，干燥得成品A，备用。

2）250 g碱蓬地上部分干药材加10倍量［（料液比为1∶1（kg∶L）］的80%乙醇加热回流提取3次，提取时间分别是2、1、1 h，合并3次提取液并浓缩至无醇味；依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，干燥得成品B，备用。

3）1 kg碱蓬地上部分干药材加10倍量［料液比为1∶1（kg∶L）］的80%乙醇加热回流提取3次，提取时间分别是2、1、1 h，合并提取液并浓缩至无醇味；上样于聚酰胺柱，用纯水洗脱除盐，再用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，浓缩，干燥得成品C，备用。

4）分别精密称取上述A、B、C 3份样品100 mg于25 mL容量瓶中，60%乙醇溶解并定容至刻度，备用。

2.2总黄酮含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品11.655 0 mg，置于100 mL容量瓶中，加60%乙醇适量，超声处理使其溶解，放冷加60%乙醇至刻度，得芦丁对照品溶液，冷藏，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备

分别量取0.3 mL的2.1.4中得到三份样品溶液，加60%乙醇5.7 mL（稀释20倍），制的供试品溶液。

2.2.3 标准曲线的绘制

分别精密量取对照品溶液0、2、4、6、10 mL至25 mL容量瓶，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，避光放置6 min；加10%硝酸铝溶液1 mL，混匀，避光放置6 min；加4%氢氧化钠溶液10 mL，用60%乙醇定容至刻度，摇匀，避光放置15 min。以相应溶剂为空白，在500 nm处测定吸光度。以分光光度计在500 nm波长处测量吸光度值A为纵坐标，芦丁质量浓度为横坐标进行回归，得回归方程A=0.000 5C+0.002（r=0.999 7），结果表明芦丁浓度在0～1 160.55 μg/mL线性关系良好，见图1。

图1 总黄酮标准曲线Table 1Total flavonoids standard curve

2.2.4 供试品溶液总黄酮含量的测定

吸取6 mL供试品溶液，按上述方法进行操作，测得A值，按对照品比较法计算被测供试品溶液的浓度，并求出其总黄酮含量。

2.2.5 精密度试验

精密吸取供试品溶液，重复测定6次，吸光度的RSD为0.15%。

2.2.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液，于室温分别放置0、3、6、12、36、48 h测定，吸光度的RSD为3.13%。

2.2.7 重现性试验

精密称取同批样品5份，按2.2.2方法制备供试品溶液，测定吸光度，计算，总黄酮的RSD为0.645%。

2.3 总皂苷的含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备

精密称取齐墩果酸对照品5.6 mg，用甲醇溶解并定容至2 mL，摇匀，既得浓度为2.8 mg/mL的齐墩果酸标准品溶液。

2.3.2 标准曲线的绘制

精密吸取齐墩果酸标准品溶液0、100、200、300、400、500、600 μL于具塞试管中，70℃水浴上蒸干或吹干，于每个试管中加新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL，置60℃水浴上加热15 min，冰水浴冷却，加冰醋酸5 mL，摇匀，以分光光度计在560 nm波长处测量吸光度值A，以A为纵坐标，齐墩果酸质量浓度为横坐标进行回归，得回归方程A= 0.000 7C+0.014 9（r=0.999 4），结果表明齐墩果酸在28 μg/mL～168 μg/mL线性关系良好，见图2。

图2 总皂苷标准曲线Table 2Total saponins standard curve

2.3.3 供试品总皂苷含量的测定

吸取100μL样品溶液，按上述方法进行操作，测得A值，每个样品各取一分测定，并计算其总皂苷含量。

2.3.4 精密度试验

精密称取测试样品溶液，重复测定6次，吸光度的RSD为0.35%。

2.3.5 稳定性试验

精密吸取供试品溶液，于室温分别放置0、3、6、12、36、48 h测定，吸光度的RSD为3.08%。

2.3.6 重现性试验

精密称取同批样品5份，按2.3.2方法制备供试品溶液，测定吸光度，计算，总黄酮的RSD为0.546%。

3结果

3.1 不同处理方法下碱蓬中总黄酮、总皂苷含量比较通过紫外分光光度法对不同处理条件下碱蓬中总黄酮、总皂苷的含量进行测定，结果如表1。

表1 总黄酮、总皂苷含量比较Table 1The content of total flavonoids and total saponins

从表1可以看出，碱蓬地上部分经纯水提取后，上样于聚酰胺柱，60%乙醇洗脱部位总黄酮含量最高，而碱蓬地上部分经80%乙醇提取后，上样于聚酰胺柱，60%乙醇洗脱部位总黄酮含量最低，但是3种不同处理方法所得的A、B、C 3个部位，总黄酮含量均大于20%。碱蓬80%乙醇提取后，经石油醚、乙酸乙酯依次萃取，得乙酸乙酯萃取部位总皂苷含量最高为13.18%，其它两种处理方法所测的总皂苷含量均在7%左右。

4讨论

1）总黄酮含量的比较分析：通过对不同处理方法下碱蓬中总黄酮含量的测定可知，碱蓬地上部分经纯水加热回流提取后，浓缩上聚酰胺柱，60%乙醇洗脱部位总黄酮含量最高为36.51%，碱蓬80%乙醇加热回流提取后，浓缩至无醇味，乙酸乙酯萃取部位总黄酮含量略低为31.98%，碱蓬80%乙醇加热回流提取后，浓缩上聚酰胺柱，60%乙醇洗脱部位黄酮含量最低为22.66%。3种不同处理方法得到的碱蓬中总黄酮含量均在20%以上，因此表明，碱蓬中含有大量的黄酮类成分。

2）总皂苷含量的比较分析：通过对不同处理方法下碱蓬中总皂苷含量的测定可知，碱蓬地上部分经80 %乙醇加热回流提取后，经石油醚、乙酸乙酯依次萃取，得乙酸乙酯萃取部位总皂苷含量最高为13.18%，其它两种处理方法所测的总皂苷含量均在7%左右。文献中报道的有关碱蓬中皂苷类成分相对较少，而本法测得的碱蓬中总皂苷含量并不低。

3）此外，药理研究表明，碱蓬具有良好的降脂、抗衰老、保健等作用，初步推测这些药理活性可能与其含有丰富的黄酮类成分有关，因此，可对碱蓬中黄酮类化学成分进行系统深入的研究，同时设计一系列药理实验，寻找其药效物质基础，这将有望开发出新型降脂、抗衰老保健药物等。关于碱蓬属植物中皂苷类成分的研究相对较少，根据本实验方法所测得的总皂苷含量，我们将有望从碱蓬中分离得到不同类型的皂苷单体并进一步通过药理实验检测其生物活性。

［1］中科院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第二十五卷，第二分册）［M］.北京：科学出版社，1979

［2］张学杰，樊守金，李法曾.中国碱蓬资源的开发利用研究状况［J］.中国野生植物资源，2003，22（2）：1-3

［3］赵宇明.分光光度法快速测定水产品中组胺的含量［J］.食品研究与开发，2014，35（8）：94-96

［4］张建扬，李明慧，徐连明，等.碱蓬籽油对小鼠血脂及免疫功能的影响［J］.职业与健康，2008，24（15）：1529-1530

［5］郑维发，陈才法，李巍.盐地碱蓬幼苗和种子氯仿/甲醇提取物的化学组成及其抗炎作用（英）［J］.中成药，2003，25（12）：997-1002

［6］张秀萍，尹丽颖，牛雯颖，等.辽东楤木叶总皂苷体外抗肿瘤作用的研究［J］.时珍国医国药，2012，23（12）：2966-2968

［7］周亚福，毛少利，李思锋，等.柴胡属5种植物总皂苷和总黄酮含量的测定［J］.时珍国医国药，2013，24（5）：1241-1243

［8］张跃林，张滨.碱蓬中黄酮的提取工艺与鉴别［J］.中国食物与营养，2008（8）：46-47

Determination of Total Flavonoids and Saikosaponins in Suaeda glauce（Bge.）Bge by UV-Vis Spectrophotometry

QIU Ping，FENG Xu，SHAN Yu，YIN Min，ZHAO You-yi，WANG Ming，WANG Qi-zhi*
（Jiangsu Center for Reaserch&Development of Medicinal Plants，Institute of Botany，Jiangsu Province and Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，Jiangsu，China）

To study the content of total flavonoids and saikosaponins in the plant of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.The content of total flavonoid and saikosaponin was determined by uv-visible spectrophotometry and Rutin and oleanolic acid as reference.The total flavonoids in the three different parts of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.were all more than 20%，in which，the total flavonoids in the 60%ethanol elution of the pure water extraction of the S.glauce from the polyamide column was up to 36.51%，while the total flavonoids in the 60% ethanol elution of The 80%ethanol extraction of the S.glauce from the polyamide column was 22.66%.The 80 %ethanol extraction of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.were extraced followed by petroleum ether and ethyl acetate，the content of total saikosaponin in the ethyl acetate was up to 13.18%，the content of total saikosaponin in other two parts were measured at about 7%.The different treatment methods influences the content of total flavonoid and saikosaponin in the plant of the Suaeda glauce（Bge.）Bge.

Suaeda glauce（Bge.）Bge.；UV spectorphotometry；chemical constituents；total flavoniond；total saikosaponin

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.015

2014-08-12

江苏省盐土生物资源研究重点实验室开放研究课题项目（JKLBS2012011）

邱萍（1987—），女（汉），在读研究生，研究方向：天然产物化学。

*通信作者：王奇志，女（汉），副研究员。