张魏龙　陆正旺　李国欢

摘要：简要介绍了罗田县山羊布鲁氏菌病净化初筛检测工作情况，就具体措施及操作方法进行系统介绍，为基层畜牧兽医机构开展净化动物疫病工作提供借鉴和参考。

关键词：动物疫病；净化；方法

中图分类号：S858.27 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2015）08-0028-02

布鲁氏菌病（以下简称“布病”）是严重危害人畜健康和阻碍畜牧业发展的人畜共患病，属国家二类传染病。2014年罗田县人感染山羊布病4例，罗田县畜牧兽医局在病人相关地区抽检山羊444只，共检出阳性病例31例，阳性率为6.98%。随着山羊养殖的快速发展和频繁的流通，羊布病感染人的威胁在加大，如不从现在着手采取必要的防控措施，将可能造成羊布病在羊群和人之间交叉感染流行，对我县公共卫生安全和畜牧业健康发展造成极大的危害。2015年5月8日，按照湖北省畜牧兽医局的指示和要求，启动了《罗田县山羊布鲁氏菌病净化实施方案》。5月11日开始进行初筛检测采样，于5月26日结束，共计采样40 040份。现汇报如下。

1 技术路线及操作规程

通过采取“检测-扑杀-监测-净化”的措施，针对不同地区不同羊场饲养情况开展布病净化工作。

（1）检测到布病阳性的羊场（户）需立即对全群羊进行布病监测，扑杀阳性羊只，其余羊只隔离饲养并每个月进行采样监测，如连续3个月未检测到布病阳性则视为假定阴性场（户），并转入每半年监测一次的常规监测，否则重复上一步措施。

（2）未检测到布病阳性的羊场（户）3个月后再进行一次抽样检测，检测无布病阳性后视为假定阴性场，转入常规监测，否则按阳性场（户）处理。

（3）检测到布病阳性的羊场（户）在采取监测、隔离、扑杀淘汰等综合防控措施，连续两年以上羊布病抽样检测阴性，无临床病例的，结合实际饲养状况和饲养规模，按照比例每半年进行一次常规监测。

2 工作步骤

2.1 摸底调查

各乡镇畜牧兽医服务中心组织村级防疫员全面统计辖区内山羊的实际存栏数量，普查工作必须进圈入舍逐户核查，并如实填写山羊调查统计表，全面摸清山羊实际饲养量、分布区域等基本情况。

2.2 采样检测阶段

技术培训工作：在各乡镇畜牧兽医服务中心抽调1～2名业务素质强的防疫员由县疫控中心集中培训，各乡镇中心再组织防疫员进行培训，按每组3人，各乡镇按人员分组组成采样队进行采样。

采样方法及数量：根据实际情况按乡镇逐步推进，在采样检测的前一天通知养殖户将所有山羊全部圈养，不得外出放牧或私自转移、隐藏、买卖。由各乡镇服务中心安排采样人员，每3人一组，逐乡镇逐村逐养殖场（户）进行按照下表比例采样。

基于风险抽样，抽样品种为：种公羊全部采集，其次重点采集有流产史的母羊、年龄超过6月龄的山羊及外地新引进的山羊。

3 样品的采集

3.1 采样前的准备

（1）统一设计印制采样登记表和样品登记表。登记表一般一式三份，一份畜主留存、一份采样单位留存、一份随样品。主要填写内容有场点名称、场点详细地址、畜主姓名及联系方式、被采样动物耳标号码及对应样品编号、被采样动物饲养情况、采样单位、采样人、采样日期等。样品登记表主要是记录清楚当日采样的场（户）数、采样数、存栏数等信息。

（2）样品编号。把乡镇按顺序用数字进行编制代码，再按照乡镇任务数由县疫控中心统一编号，样品编号具体是由乡镇代码+动物代码+数字组成，用不干胶标签纸打印。

（3）采样用品的选择。个人防护用品我们采用的是质量较好的一次性防护服、手套、口罩等；采血器材我们采用的是兽用一次性采血贮血器，即可用离心机直接分离血清又可以把已析出血清的拧开前盖直接检测。

3.2 采血和样品的处理：

（1）采血方法。山羊采血应提前一天通知山羊养殖户做好准备（山羊不能出外放牧，只能圈养），山羊采血采用采血器颈静脉采血不少于3 mL，3人为一组，一人保定、一人采血、一人登记。负责采血的人采完血后一是拔下采血器的针头、拧下采血器的活塞的拉杆并放入准备好的塑料袋中。二是对没有佩戴耳标的羊打上耳标，并把耳标号码报给负责登记的人；负责登记的人一是负责给采好血的采血器上贴上样品编号标签，并在采样表上记录清楚样品编号和对应的耳标号码；二是负责收集血样，方法是每10份血样扎一捆，并在每捆血样上写清楚个场（户）名；三是负责将采好的血样竖立放入带冰的保温箱中（气温低于24 ℃可以常温保存）。负责保定的人采取“骑跨式”保定，一只手抓住山羊羊角或耳朵，一只手托住山羊的下巴略向后倾斜。

（2）样品的收集。乡镇服务中心每天下午负责将采好的血样、采样表收集整理，样品和对应采样表按顺序编好序号在《样品信息登记表》填写清楚，一份留存一份盖章随样品。血样要用保温箱冷藏运输，由县疫控中心或分片集中运送至县实验室。

（3）采样时注意事项。①要做好个人防护，要穿带好防护服、口罩、手套等，采血操作过程中禁止饮食、吸烟等；采血时应避免采血器扎伤。②做好山羊采样保定，保定采取“骑跨式”保定，两手抓住山羊羊角或耳朵，防止发生因保定不当造成山羊伤害的事情发生。每采一个羊场要把防护服、口罩、手套、采样等废弃物品集中焚烧深埋。③要做好采样途中的交通安全，采样期间禁止采样相关人员饮酒等。

4 实验室检测

4.1 样品的接收

我们采取的是下午集中送样，样品接收员一是按照各乡镇样品信息登记表与采样表、血样逐一核对，确保样品与采样表上登记的信息相符后按乡镇用文件夹分开存放。二是将样品分乡镇标记时间乡镇等信息后放入冰箱4 ℃保存。三是在样品接收的第二天将样品接收信息按照采样表分乡镇登记电子表格并制作汇总表，便于及时了解各乡镇采样动态。

4.2 样品的处理

每天样品处理人员按照样品信息。一是将采血器内析出好的血清倒入1.5 mL的离心管中并贴上与采血器上相同的样品编号标签。二是将没有析出血清的采血器用离心机2 800 r/min离心5 min，再将分离好的血清倒入1.5 mL离心管，每个离心管上要贴上与采血器上相同的样品编号标签。三是将分离好的血清分乡镇装入封口袋，在封口袋上用记号笔写上乡镇、存放日期、样品数量等信息并按日期分乡镇在样品保存表上登记清楚。

4.3 样品检测

（1）检测程序是先用虎红平板凝集试验进行初筛，对初筛检出的疑似阳性血样送市兽医实验室进行试管凝集试验进行复核。

（2）采用9 cm×13 cm的透明玻璃块代替载玻片，每块玻璃可检测样品6份以上。优点一是单次检测样品数多，每次加完样品后可立即判定省去反应等待的时间，增快检测速度；二是玻璃片易清洗，不易破损。

（3）对已析出血清的拧开采血器的上盖直接进行检测。没有析出血清的用离心机分离出血清后再进行检测。我们采取只对凝似阳性血清留样集中送市实验室复核，阴性样品直接废弃。

（4）填写完善的检测记录，对凝似阳性样品根据编号对照采样表找出对应的耳标号码。

5 阳性羊只的处置

根据检测结果出具检验报告，县动物疫病预防控制中心根据检测报告，对确诊为阳性的向县动物卫生监督所下达《山羊布病净化处置通知书》，由县动物卫生监督所监督扑杀和无害化处理；同群进行隔离饲养观察、划定区域放牧，定期复查。对扑杀山羊及其流产胎儿、胎衣、排泄物、乳、乳制品等应深埋或烧毁，被病羊污染的圈舍、场地、用具等用10%石灰乳、2%热烧碱液进行消毒处理，粪便则需经生物热发酵进行无害化处理；并对环境进行消毒灭源。