杨新平（宜春市人民医院血液科　宜春 333600）

IL-17、IL-23、VEGF在再生障碍性贫血患者血清中的检测及其临床意义*

杨新平**
（宜春市人民医院血液科宜春 333600）

目的：探讨再生障碍性贫血患者血清中的白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-23（IL-23）、血管内皮生长因子（VEGF）的检测及其临床意义。方法：选取2010年1月至2015年1月期间我院血液科住院部40例再生障碍性贫血患者作为研究组，同期选取45例健康体检者作为对照组，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清IL-17、IL-23、VEGF水平，并比较两组间各水平的差异；采用Pearson相关性分析这些指标间的关系。结果：研究组患者血清IL-17、IL-23水平明显高于对照组，而血清VEGF水平明显低于对照组；重型者血清IL-17、IL-23水平明显高于非重型者，而血清VEGF水平则明显低于非重型者，差异具有统计学意义（P＜0.05）；经Pearson相关性分析显示，再生障碍性贫血患者血清IL-17与血清IL-23呈明显的正相关（r=0.501，P＜0.05），血清IL-17、 IL-23与血清VEGF呈明显的负相关（r=-0.541、-0.559，P＜0.05）。结论：IL-17、IL-23水平在再生障碍性贫血患者血清中显著增高，VEGF显著降低，三者共同参与再生障碍性贫血疾病发生和发展的过程。

IL-17IL-23VEGF再生障碍性贫血

再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）是指由多因素导致骨髓造血微环境、造血干细胞和免疫调节因子异常，最终形成骨髓造血干细胞减少，造血功能异常的恶性血液系统疾病[1]。同时，相关研究表明，细胞因子是再生障碍性贫血病情发生和发展期间的关键因素[2]。本研究通过酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清白细胞介素-17（Interleukin-17，IL-17）、白细胞介素-23（Interleukin-23，IL-23）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）水平在AA患者中变化，探讨上述细胞因子在再生障碍性贫血疾病发生中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料

选取2010年1月至2015年1月期间我院血液科住院部40例初诊再生障碍性贫血患者作为研究组，其中男28例，女12例，年龄11～67岁，平均年龄（34.85±6.24）岁，重型再生障碍性贫血19例，非重型再生障碍性贫血21例，全部患者符合再生障碍性贫血的诊断标准[3]，排除合并肝肾功能障碍、合并其他造血系统疾病和精神性疾病患者。同期选取45例健康体检者作为对照组，其中男30例，女15例，年龄12～65岁，平均年龄（35.01±6.09）岁，排除心肝肾功能障碍和恶性疾病患者。两组患者在性别、年龄等一般资料间的比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2检测方法

检测试剂与仪器：IL-17试剂盒和IL-23试剂盒（上海丽臣生物公司），VEGF试剂盒（美国R&B公司），ELX800酶标仪、ELX洗板仪（美国BIO-Tek公司），LDZ5-2型离心机（北京雷动尔公司），-80 ℃低温冰箱、振荡器、温箱（日本三洋公司）。

检测方法：采集受检者清晨空腹外周静脉血液标本2 ml放置于普通干燥管，室温下自然凝固2 h后，经250 r/min离心处理10 min分离血清，-80 ℃下保存，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IL-17、IL-23、VEGF水平，严格按照试剂盒说明书操作，将IL-17、IL-23、VEGF抗体包被于ELISA板，加入待测血清，阴性对照和倍比稀释标准样品，常温下孵育，磷酸缓冲液（PBS）洗涤后滴加酶标抗体，常温下孵育，PBS洗涤。采用底物显色剂显色，终止反应后采用酶标仪测定450 nm处的吸光度OD值，以标准样品稀释液浓度作为横坐标，以标准样品OD值作为纵坐标绘制IL-17、IL-23、VEGF标准曲线，根据样品的OD值和稀释倍数计算对应的IL-17、IL-23、VEGF含量。

1.3观察指标

比较两组间血清IL-17、IL-23、VEGF水平的差异。

1.4统计学处理

本研究数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析，两组间的计量资料采用t检验，计量资料采用（±s）表示，两样本变量间的相关性分析采用Pearson相关性分析处理，P＜0.05提示差异具有统计学意义。

2　结果

2.1两组血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比较

研究组患者血清IL-17、IL-23水平明显高于对照组，而血清VEGF水平明显低于对照组，两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05，表1）。

表1　两组血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比较

2.2不同程度再生障碍性贫血患者血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比较

重型再生障碍性贫血患者血清IL-17、IL-23水平明显高于、而血清VEGF水平明显低于非重型再生障碍性贫血患者，两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05，表2）。

表2　不同程度再生障碍性贫血患者血清IL-17、IL-23、VEGF水平的比较

2.3血清IL-17、IL-23、VEGF间的相关性分析

经Pearson相关性分析显示，再生障碍性贫血患者血清IL-17与血清IL-23呈明显的正相关（r=0.501，P＜0.05，图1A），血清IL-17与血清VEGF呈明显的负相关（r=-0.541，P＜0.05，图1B），血清IL-23与血清VEGF呈明显的负相关（r=-0.559，P＜0.05，图1C）。

图1　再生障碍性贫血患者血清IL-17、IL-23和VEGF水平之间相关性分析

3　讨论

再生障碍性贫血是主要以全血细胞数量减少为主的临床病理综合征。大量研究证实，CD4+辅助T细胞免疫调节紊乱与再生障碍性贫血发病紧密相关[4]。辅助性T细胞17（Th17）是一种CD4+辅助T细胞亚群的常见指标之一，其通过产生细胞因子，后者与免疫细胞相互作用发挥免疫调节功能[5]。IL-17、IL-23由辅助性T细胞分泌的主要细胞因子，其中IL-17是辅助性T细胞分泌调节性细胞因子之一，IL-23是辅助性T细胞发育分化的主要调控因子[6]。但关于两者在再生障碍性贫血患者中的血清水平及其意义研究甚少。VEGF基因位于染色体6P12，全长14 kb，由8个外显子和7个内含子组成，VEGF表达于血管内皮细胞表面。VEGF通过增加血管通透程度，促进血管形成，纠正造血细胞VEGF基因缺乏导致的凋亡和集落生成功能降低。VEGF还可通过与促红细胞生成素、粒-巨噬细胞集落刺激因子相结合共同促进造血细胞的集落生成[7]。

本研究结果表明：再生障碍性贫血患者血清IL-17、IL-23水平显著增高，其中IL-17具有促进炎症反应，诱导巨噬细胞分泌IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子等，促进辅助性T细胞分化和诱导Tc细胞活化，由辅助性T细胞分泌的IL-17含量增加。因此，再生障碍性贫血患者血清IL-17水平显著增高，其与相关文献提及的再生障碍性贫血患者IL-17 mRNA表达上调具有高度一致性[8]。其次，IL-23由抗原提呈细胞分泌，其通过与成熟辅助性T细胞表面IL-23受体相结合，调控辅助性T细胞分化和功能，促进T细胞，红细胞生成素产生干扰素和白介素-12，参与树突状细胞的共同刺激功能，其与炎症和肿瘤性疾病显著相关。小鼠缺乏IL-23基因后体液免疫系统严重受损，IL-23缺失的促红细胞生成素刺激T辅助细胞分泌能力显著降低[9]。再生障碍性贫血通过刺激辅助性T细胞异常分泌IL-17，刺激肿瘤坏死因子，干扰素和白细胞介素-12的异常分泌，促进Th1/Th2失调，导致T细胞功能紊乱，调节辅助性T细胞发育分化的调控因子IL-23含量增高。因此，再生障碍性贫血患者血清IL-23水平显著增高。再生障碍性贫血患者由于骨髓造血功能障碍，骨髓血管生成能力减弱，血管通透性降低，供血供氧减少，新生血管形成能力减弱，血管内皮生长因子（VEGF）分泌量减少，因此，再生障碍性贫血患者血清VEGF显著降低。本研究还发现，重型再生障碍性贫血患者IL-17、IL-23增高程度更显著，而VEGF降低水平更为明显，三者水平改变在评估再生障碍性贫血病情程度中具有重要的意义，其中IL-17、IL-23水平越高，提示再生障碍性贫血病情较为严重，而VEGF水平越高则提示疾病病情较轻[10]。本研究经相关性分析表明，再生障碍性贫血患者血清IL-17、IL-23呈明显的正相关，而两者与血清VEGF呈明显的负相关，进一步证实了再生障碍性贫血患者血清IL-17、IL-23水平越高，疾病病情越严重；反之，血清VEGF水平越低，疾病病情越严重。

综上所述，IL-17、IL-23水平在再生障碍性贫血患者血清中显著增高，VEGF显著降低，三者共同参与再生障碍性贫血疾病发生和发展的过程。

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Detection of serum IL-17, IL-23, VEGF in patients with aplastic anemia and its clinical significance*

YANG Xinping**
(Department of Hematology, The People Hospital of Yichun City, Yichun 333600, China)

Objective: To investigate the detection of serum IL-17, IL-23, VEGF in patients with aplastic anemia and its clinical significance. Methods: Forty cases of inpatients with aplastic anemia from January, 2010 to January, 2015 in our Department were selected as a research group while 45 healthy persons as a control group in the same period. Serum IL-17, IL-23 and VEGF levels were detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results were compared between two groups and the relationship between serum IL-17 and IL-23 levels, IL-17 or IL-23 and VEGF levels were analyzed by Pearson correlation. Results: The levels of serum IL-17 and IL-23 were significantly higher while the serum VEGF levels were significantly lower in the research group than in the control group. The results were same when compared between the patients with severe and non-severe aplastic anemia and the differences had statistical significance (P<0.05). The Pearson correlation analysis showed that serum IL-17 and IL-23 levels were positive correlated (r=0.501, P<0.05) while serum IL-17 or IL-23 and VEGF levels showed a significant negative correlation (r=-0.541, -0.559, P<0.05). Conclusion: IL-17, IL-23 levels increase significantly while VEGF levels decrease significantly in patients with aplastic anemia, and three indexes together participate in the occurrence and development process of aplastic anemia disease.

IL-17; IL-23; VEGF; aplastic anemia

R556.5; R446.62

A

1006-1533(2015)13-0034-04

2013年江西省卫生厅科研计划（普通）课题（2013B012）

**

杨新平（1974-），男， 硕士，副主任医师，从事血液科疾病临床研究。E-mail: xp1002@126.com

2015-03-25）