罗史科，刘鲜花，伍 和，金 娴，樊春卉，朱平安

（盐田区人民医院检验科，广东深圳518081）

铜绿假单胞菌（PA）是条件致病菌也是医院感染细菌的重要成员，随着抗菌药物应用人群的不断扩大，PA 对喹诺酮耐药性有不断上升的趋势［1］。已获得耐药质粒的PA 菌株对抵抗力弱的人群有时是致命的［2］。及时发现细菌获取耐药性的能力，破解细菌耐药质粒是人类应对PA 的途径之一。因此研究PA 诱变获取耐药质粒的过程及机制有一定的临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集2012年1月到2013年12月本院各科送检细菌培养的合格临床标本，一共481份。

1.2 仪器与试剂 主要仪器包括DNA 自动加热循环器（美国Perkin Elmer公司）、紫外线分析仪、epp偏振照相仪、酶标分光光度计，微型、水平和垂直电泳仪，MPRA4I高速冷冻离心机、真空干燥机、培养摇床、超低温冰箱、法国梅里埃细菌鉴定仪。主要耗材和试剂包括血培养皿、普通琼脂培养皿，PA标准菌株ATCC27853（由深圳北大医院检验科刘小平主任惠赠），奈啶酸、环丙沙星药敏纸片，质粒提取试剂（深圳雅瑞尔科技公司提供），引物（上海Introvigen公司合成）。

1.3 方法

1.3.1 PA 菌的获取［3］481份样品接种于血培养皿，挑取单个菌落用梅里埃细菌鉴定仪鉴定为PA 菌株，均与标准菌株ATCC27853比对，共获得31份PA 样品。

1.3.2 对喹诺酮敏感的PA 菌株的挑选 用K－B纸片琼脂扩散法进行。根据CLSI药敏试验执行标准判断敏感（S）、中介（I）或耐药（R）［4］。31份PA 菌株经奈啶酸、环丙沙星纸片药敏试验后分为耐药PA 菌株15份，敏感PA 菌株16份。16份对喹诺酮敏感PA 菌株则为备用菌，每一份备用菌用2 个2 mL EP管（塑料带盖离心管）加甘油分别保存然后将备用菌迅速放入－80 ℃。……