王亚飞，冯　霞，马　莉，韩　锋，高　静，邓晋丽

复方灯盏头痛片提取物的活性筛选*

王亚飞1，冯霞1，马莉2，3，韩锋2，3，高静2，3，邓晋丽1

（1.天津大学理学院，天津300073；2.天津药物研究院，天津300193；3.中药现代制剂与质量控制技术国家地方联合工程实验室（天津），天津300193）

［目的］对不同工艺制备的复方灯盏头痛片提取物进行药效学比较研究。［方法］采用小鼠水浴甩尾反应实验、醋酸致小鼠扭体实验、硝酸甘油致小鼠偏头痛模型以及利血平低5-HT化小鼠偏头痛模型，对不同提取工艺所得复方提取物进行药效学筛选。［结果］3种工艺提取物均能有效提高甩尾潜伏期，抑制小鼠的扭体反应，具有明显的镇痛作用，其中以醇提物组效果最为显著；在硝酸甘油致小鼠偏头痛实验中，醇提物高低剂量组均能明显减少小鼠挠头次数，水提物及醇水双提物只有高剂量组可明显减少小鼠挠头次数（P＜0.05）；利血平低5-HT化小鼠偏头痛模型实验中，3种提取物均可提高脑组织及血液中5-HT的含量，其中以醇提物提升效果最为显著。［结论］相同剂量的复方醇提物药效活性优于水提物及醇水双提物，醇提工艺为其较优提取工艺，可作进一步研究和开发。

提取工艺；复方灯盏头痛片提取物；偏头痛；动物模型；镇痛

偏头痛是一种临床最常见的原发性头痛类型，以发作性搏动性头痛为特征，发作呈密集性、间歇性［1］。主要表现为一侧或双侧头部跳动，伴有恶心、呕吐等植物神经症状［2］。在中医学中，偏头痛属于“头风”、“偏头风”范畴［3］。复方灯盏头痛片为纯中药制剂，主要由灯盏细辛、川芎、白芷、独一味等6味中药组成。君药灯盏细辛系菊科植物短亭飞蓬的干燥全草，性寒、味苦、微辛，具有散寒解表、祛风除湿、活络止痛之功效［4］，主治感冒、头痛、鼻塞、风湿痹痛、瘫痪、小儿疳积、跌打损伤等。川芎、白芷是治疗偏正头痛的常用药物，常配伍使用，运用广泛［5-7］。独一味系唇形科独一味属植物，全草入药，性味甘，苦，平，具有活血祛瘀，消肿止痛之功效，常用于治疗各种外科手术后的刀口疼痛、出血、风湿痹痛等，是藏族习用药材之一。本研究对不同提取工艺复方灯盏头痛片提取物进行药效学考察，以期优选出对偏头痛治疗效果显著的提取工艺，为其进一步开发和利用提供实验支撑。

1　材料

1.1动物健康KM小鼠，等级为SPF级，体质量为18～20 g，雌雄各半，购于天津市津南区春乐实验动物养殖场动物实验中心，实验动物生产许可证号：SCXK-（军）2009-003。

1.2药物灯盏细辛购于云南，经含量测定符合药典要求。其余各味药购于天津市中药饮片厂。

复方醇提物制备：取灯盏细辛等6味中药，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1 h。醇提液合并，减压浓缩至浓度为每克含生药1.40 g的浸膏，备用。

复方水提物制备：取灯盏细辛等6味中药，加10倍量水，煎煮3次，每次1 h。乙醇沉淀，取滤液减压浓缩至浓度为每克含生药2.27 g的浸膏，备用。

复方醇水双提物制备：取灯盏细辛等6味中药，加8倍量80%乙醇，回流提取2次，每次1 h。醇提液待用。药渣加8倍量水，煎煮2次，每次1 h。60%乙醇沉淀，滤液与醇提液合并，减压浓缩浓度为每克含生药1.5 g的浸膏，备用。

1.3药品与试剂氯化钠注射液（河北天成药业股份有限公司，E13080407）。尼美舒利（天津药物研究院药业有限责任公司，130508），以生理盐水制成0.498 mg/mL溶液。硝酸甘油注射液（每毫升含硝酸甘油5 mg，北京益民药业有限公司，20121123）。利血平注射液（每毫升含利血平1mg，天津金耀氨基酸有限公司，20100930），乙醇（药用级），5-羟色胺（5-HT）为Sigma产品，其余化学试剂均为国产分析纯。

1.4仪器电子分析天平（AB204-N，Metter Toledo科技有限公司），电子天平（YP3001N，上海精密科学仪器有限公司），调温电热套（ZDHW，北京中兴伟业仪器有限公司），恒温水浴锅（TDA-8002，余姚市东方电工仪器厂），真空干燥箱（82A型，上海市实验仪器总厂），电动玻璃匀浆机（DY89-I，宁波新芝生物科技股份有限公司），旋转蒸发器（R501B，无锡市星海王生化设备有限公司），荧光分光光度仪（F95S，上海棱光技术有限公司），秒表（CASIO，HS-3V）

2　方法

2.1小鼠水浴甩尾反应实验选用阈值合格的KM小鼠80只，随机均分成8组，雌雄各半，阳性药（尼美舒利）组按表1所示剂量灌胃给药；第3～8组为实验组，分别口服灌胃复方醇提物、水提物及醇水双提物（给药剂量见表1），对照组给予等容积生理盐水。每日1次，连续给药3 d。于实验前及末次给药1 h及3 h分别将小鼠尾尖1.5 cm浸入恒温水浴中（55±0.5）℃，用秒表记录鼠尾自浸入水中到出现甩尾动作的时间，作为甩尾反应潜伏期。

2.2醋酸致小鼠扭体反应实验取健康KM小鼠80只，分组、给药方法及剂量同2.1项。末次给药30 min后，各组小鼠均静脉注射0.7%醋酸溶液（10 mL/kg）［8-11］，记录注射醋酸溶液后，第2个10 min内的扭体次数。

2.3硝酸甘油致小鼠偏头痛模型实验取健康KM小鼠90只，随机均分成9组，雌雄各半，阳性药组及实验组给药方法及剂量同2.1项，空白对照组和模型组均给予等容积生理盐水。末次给药30 min后，除空白对照组外其余各组小鼠均皮下注射硝酸甘油注射液（10 mg/kg），复制实验性偏头痛模型，造模后，小鼠出现双耳发红、前肢频繁搔头、爬笼次数增多等行为症状表明偏头痛动物模型制作成功［12］。记录注射硝酸甘油注射液后，第2个20 min内小鼠的挠头次数。

2.4利血平致小鼠偏头痛模型实验取健康KM小鼠90只，分组、给药剂量方法同2.3项，除空白对照组外其余各组小鼠均皮下注射利血平10 mg/kg，连续14 d。从第7天起，实验组分别灌胃复方醇提物、水提物及醇水双提物，空白对照组和模型组给予等容积生理盐水，每日1次，连续给药7 d，阳性药对照组实验当日按表4所示剂量口服灌胃给药1次。于第14天给药1 h后，摘眼球取血，而后脱颈椎处死动物，迅速分离脑组织，操作在冰台上完成。测定时，用匀浆器制备脑组织匀浆液（在冰浴中）。荧光法测定脑组织及血液中5-HT含量［13-14］。

3　结果

3.1对小鼠水浴甩尾反应的影响给药前各组甩尾潜伏期无统计学差异（P＞0.05）。给药后各组与对照组比较，3种提取工艺所得提取物均可有效延长小鼠甩尾反应潜伏期，给药3 h后仍有效，镇痛效果良好。其中醇提物高剂量组效果最为显著（P＜0.001），见表1。

表1　复方灯盏头痛片提取物对小鼠水浴甩尾反应的影响

表1　复方灯盏头痛片提取物对小鼠水浴甩尾反应的影响

注：与对照组比较，*P＜0.001，#P＜0.01，△P＜0.05。

给药后不同时间甩尾潜伏期（s）1 h　3 h对照组　—　1.625±0.206　1.62±0.23　1.64±0.23阳性药组　5×10-3　1.627±0.209　2.28±0.46#　2.25±0.48#醇提物低剂量　0.62　1.632±0.198　1.95±0.35△　2.00±0.35△醇提物高剂量　1.23　1.612±0.214　2.20±0.46#　2.21±0.35*水提物低剂量　0.62　1.634±0.226　1.88±0.36　1.93±0.37水提物高剂量　1.23　1.622±0.210　1.95±0.36△　2.12±0.47△醇水双提物低剂量　0.62　1.634±0.254　1.93±0.45　1.93±0.39醇水双提物高剂量　1.23　1.624±0.206　2.01±0.41△　2.02±0.36△组别　给药剂量（g/kg）给药前甩尾潜伏期（s）

3.2对醋酸致小鼠扭体的影响与对照组比较，3种提取工艺提取物均能有效抑制醋酸导致的小鼠扭体反应（P<0.05），具有明显的镇痛作用。复方醇提物能显著抑制小鼠扭体次数（P＜0.05），其中高剂量组效果最显著（P＜0.01），其余两种提取工艺只有高剂量组能减少小鼠扭体次数（P＜0.05），见表2。说明复方灯盏头痛片具有一定的镇痛效果，醇提物镇痛效果更显著。

3.3对硝酸甘油致偏头痛小鼠挠头次数的影响造模后各组小鼠较空白对照组均出现前肢频繁搔头、爬笼次数增多，说明实验性偏头痛小鼠模型制作成功。与模型组比较，复方醇提物可明显减少硝酸甘油致模型小鼠的挠头次数（P＜0.05），其中高剂量组效果更显著（P＜0.01）；复方水提物及双提物高剂量组可显著减少小鼠挠头次数（P＜0.05），低剂量组则无明显抑制作用。见表3。

表2　复方灯盏头痛片提取物对醋酸致小鼠扭体的影响（x±s，n=10）

表2　复方灯盏头痛片提取物对醋酸致小鼠扭体的影响（x±s，n=10）

注：与对照组比较，*P＜0.01，#P＜0.05。

组别　给药剂量（g/kg）　扭体数（次）对照组　—　20.3±9.7阳性药组　5×10-3　9.7±4.6*醇提物低剂量　0.62　10.3±4.2#醇提物高剂量　1.23　7.6±3.9*水提物低剂量　0.62　13.1±6.9水提物高剂量　1.23　10.7±5.7#醇水双提物低剂量　0.62　14.7±6.6醇水双提物高剂量　1.23　10.8±4.6#

表3　复方灯盏头痛片提取物对硝酸甘油致偏头痛小鼠挠头次数的影响

表3　复方灯盏头痛片提取物对硝酸甘油致偏头痛小鼠挠头次数的影响

注：与模型组比较，*P＜0.01，#P＜0.05。

组别　给药剂量（g/kg）　挠头数（次）空白对照组　—　9.1±3.95*模型组　—　23.7±10.10阳性药组　5×10-3　13.6±6.00#醇提物低剂量　0.62　15.1±7.60#醇提物高剂量　1.23　12.3±6.80*水提物低剂量　0.62　18.9±9.10水提物高剂量　1.23　15.7±5.60#醇水双提物低剂量　0.62　19.1±9.00醇水双提物高剂量　1.23　15.8±5.70#

3.4对偏头痛模型小鼠5-HT水平的影响与模型组比较，3种提取工艺所得复方提取物均能显著升高模型小鼠脑内及血液中的5-HT水平。其中醇提物对5-HT水平的影响最为明显（P＜0.001，P＜0.01，P＜0.05），见表4。

表4　对偏头痛模型小鼠脑内及血中5-HT的影响

表4　对偏头痛模型小鼠脑内及血中5-HT的影响

注：与模型组比较，*P＜0.001，#P＜0.01，△P＜0.05。

血液中含量（μg/g）模型组　-　0.032±0.018　0.082±0.025阳性药组　5×10-3　0.068±0.022#　0.145±0.044#醇提物低剂量　0.62　0.057±0.0201△　0.135±0.048#醇提物高剂量　1.23　0.070±0.029#　0.153±0.046*水提物低剂量　0.62　0.048±0.0233　0.132±0.050△水提物高剂量　1.23　0.058±0.021△　0.151±0.048#醇水双提物低剂量　0.62　0.050±0.020　0.134±0.049△醇水双提物高剂量　1.23　0.056±0.019△　0.149±0.051#组别　给药剂量（g/kg）脑中含量（μg/g）

4　讨论

中药复方复杂的有效成分，一直困扰科研工作者对其作用机制进行阐明，即使作用机制较为清楚的复方，其药效也是多种有效成分协同作用的结果。偏头痛属于中医“头风”的范畴，为内伤头痛。中医辨证认为，头风是由风火上攻头目、痰浊中阻、瘀阻经络、血行不畅引起的，一般头风病的发作期以风、痰、瘀、热为主，缓解期则多见虚和瘀［15-18］。本方以行气通脉，祛风、平肝息风、化瘀止痛为原则诸药合用［19］，观察其对偏头痛模型小鼠的药效学影响。

本实验初步考察了复方灯盏头痛片不同工艺提取物的镇痛作用及对实验性偏头痛模型小鼠的影响。在小鼠水浴甩尾及醋酸致小鼠扭体镇痛实验中，不同工艺提取物均表现出镇痛作用，其中以醇提物组镇痛作用最为明显。硝酸甘油致小鼠偏头痛模型实验显示，复方醇提物高低剂量组均能明显减少小鼠挠头次数，水提物和醇水双提物只有高剂量组可明显减少小鼠挠头次数，低剂量组对小鼠挠头次数均无明显抑制作用。不同复方提取物能显著提高脑组织及血液中5-HT的含量，其中以醇提物提升效果最为显著。

提取工艺是影响中药复方制剂药效好坏的影响因素之一。不同提取工艺复方灯盏头痛片提取物对小鼠偏头痛影响的结果显示，复方灯盏头痛片醇提物药效活性优于另外两种工艺提取物，镇痛作用较强，对偏头痛的治疗效果更优。不同提取工艺的药效差异主要是提取物有效成分的含量和多个有效成分间比例的差别，本研究下一步拟采用HPLC、UV-VIS等技术，对不同提取工艺提取物的有效成分进行分析，并结合其他药效学指标、生产成本等，在本实验结果的基础上，进一步筛选优化出一条合理有效的复方灯盏头痛片提取路线。

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Comparative studies on pharmacological effects of compound erigeron headache tablet with different extraction techniques

WANG Ya-fei1，MA Li2，3，HAN Feng2，3，GAO Jing2，3，DENG Jin-li1
（1.School of Science，Tianjin University，Tianjin 300072，China；2.Tianjin Institute of Pharmaceutical Research，Tianjin 300193，China；3.National&Local United Engineering Laboratory of Modern Preparation and Quality Control Technology of Traditional Chinese Medicine（Tianjin），Tianjin 300193，China）

［Objective］To compare pharmacological properties of different extracts of compound erigeron headache tablet and to select the optimum extracting technique.［Methods］The method of acetic acid twisting and thrilling test were adopted in the research of analgesic effect，one mice migraine model was induced by nitroglycerin（10 mg/kg）and the other was duplicated by subcutaneous injection of reserpine，and then were treated with the extracts of compound.［Results］The extracts of compound erigeron headache tablet could significantly prolong the latency of thrilling，also could decrease the number of twisting，and had an obvious analgesic effect，the alcohol extracts in high dosage group were more effective than the others.The experiments of therapeutical effect showed that the alcohol extracts could both reduce the number of scratching.Water extracts and alcohol-water extracts only worked in high dosage group（P＜0.05）.The extracts could significantly increased 5-HT level，and the alcohol extracts group were more effective than the others.［Conclusion］The pharmacological effects of alcohol extracts are better than the other two in the same dose，the extraction method of alcohol is the optimum extraction technique.It is worth further researching and developing.

extraction technique；compound erigeron headache tablet；migraine；mice models；analgesic

R285.6

A

1673－9043（2015）02－0100-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2015.02.09

天津市科技支撑计划（12ZCDZSY19100）。

王亚飞（1990-），女，硕士，主要从事中药新药方向的研究。

冯霞，E-mail:f_x@tju.edu.cn.com；马莉，E-mail:zhihua504@163.com。

（2014-10-25）