费选文 张苏伟 孟令英

广东省汕头市中心医院检验科，广东汕头515031

熊果酸（UA）属于五环三萜类化合物，广泛分布于自然界中[1-5]。UA对多种致癌和促癌物质均有不同程度的抵抗作用，并且能够抑制多种实体肿瘤细胞的生长[1-5]。Ning等[6]（2012年）探讨了来源于髓系的人白血病细胞U937中由UA诱导的细胞凋亡过程，结果表明，PKB失活和JNK活化在UA引起的细胞凋亡中发挥着重要的作用。活性氧自由基（ROS），包括H2O2和超氧化物自由基，引起细胞的氧化应激，这正是内源性凋亡途径的启动因素，如Azhar等[7]（2011年）发现，在人白血病细胞株THP-1中，化合物诱导的凋亡与ROS的生成及JNK激活有关，用NAC抑制ROS的产生可以抑制JNK信号激活及凋亡，这说明正是ROS水平的增高引起上述过程。

本文通过UA诱导K562细胞凋亡，针对性检测ROS这一关键分子靶点，探讨ROS在UA诱导K562细胞凋亡过程中的作用，为UA临床应用积累有价值的参考资料。

1 材料与方法

1.1 材料

慢性粒细胞白血病细胞株K562以及熊果酸由汕头大学医学院中心实验室惠赠；RPMI-1640购自GIBCO；Annexin V/PI、DCFH-DA荧光染料购自Sigma公司。

1.2 细胞培养与分组

K562细胞在含10%胎牛血清和100U/L青霉素以及100U/L链霉素的RPMI-1640培养基里悬浮培养。取1×106个/mL浓度的细胞分四组，分别以0、10、20、40μmol/L UA 作用 48h。

1.3 细胞形态观察

取对数生长期各组K562细胞，接种于培养瓶，48h后分别加入 10、20、40μmol/L 浓度的 UA，处理48h后在倒置显微镜下观察细胞形态变化并拍摄记录细胞形态。

1.4 细胞凋亡检测

收集四组处理后的细胞，1500rpm离心5min，弃上清，用PBS重悬细胞并计数。取1×106个重悬的细胞，1500rpm离心5min后弃上清，加入195μL Annexin V-FITC结合液轻轻重悬细胞。……