刘海刚，李 钦，文晓燕，叶建州△

（1.云南中医学院临床医学院，云南 昆明650011；2.云南省中医医院，云南 昆明650021）

银屑病（Psoriasis）是一种常见的、易复发的慢性炎症性红斑鳞屑性皮肤病[1]。银屑病受种族、地理、环境等因素的影响，各地的患病率从0 到11.8%不等[2-3]。我国银屑病患病率约为0.47%，男女患病率接近[4]。根据银屑病的临床特征，通常可分为寻常型、脓疱型、关节型和红皮病型，以寻常型最为多见，约占97.06%；其它类型占比较少[5]。消银2 号为云南省中医医院皮肤科叶建州主任医师治疗寻常型银屑病血燥证之经验方。本实验通过5%心得安法诱导银屑病豚鼠模型，观察消银2 号对豚鼠银屑病样皮损组织学病理学评分（Baker 评分）、PCNA 含量的影响。探讨其治疗寻常型银屑病的机制。

1 材料

1.1 实验动物

普通级豚鼠，体质量300～400g，雌雄各半，四川简阳达硕实验动物有限公司提供，生产许可证号：Scxk（川）2008_24，合格证号：0002861。

1.2 药物与试剂

“消银2 号”流浸膏，当归饮子流浸膏，0.9%氯化钠注射液（贵州天地药业H52020069），盐酸普萘洛尔原料药（纯度≥99%）（湖北兴银河化工有限公司20140211），PCNA ELISA 试剂盒（R&B 公司201406）。

1.3 主要仪器

Thermo 高速离心机（赛默飞世尔科技），Thermo全自动酶标仪洗板机（赛默飞世尔科技），石蜡切片机（Leica RM2235 型）、LEICA-DM2500 正置显微镜及图文系统（德国徕卡）。

2 方法

2.1 分组及造模

适应性饲养1 周，第2 周开始实验，将豚鼠双耳绒毛剃去，将豚鼠随机分为6 组：空白组、模型组、对照组（当归饮子）和消银2 号低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组8 只，参照文献[6]除空白组豚鼠外，剩余5 组均用5%盐酸普萘洛尔乳膏均匀涂抹豚鼠双侧耳背，面积约1cm2，厚度约1mm，4 次/d，共3 周。

2.2 给药

造模3 周后开始给药：消银2 号高、中、低剂量组（26.7 g·kg-1、13.4 g·kg-1、6.68 g·kg-1）ig、当归饮子组（9.88 g·kg-1）ig、模型组和空白组生理盐水ig，每日1 次，共2 周。每2d 测量1 次体质量，调整给药量。

2.3 检测指标与方法

2.3.1 豚鼠耳部银屑病样皮损组织病理学评分

用药2 周后，10%水合氯醛麻醉，颈动脉采血后处死，随即剪取双侧耳组织。耳组织分3 份，其中1份液氮冷冻后-80℃冰箱保存（待组织匀浆用），其余2 份常规修剪制片，最后在光学显微镜下观察病理改变。参照Baker 法[7]制定病理组织学评分标准。Baker 法积分评估的标准如下：角质层中见有Munro小脓疡计2.0 分；角化过度计0.5 分；角化不全计1.0 分；表皮层中见有颗粒层变薄或消失计1.0 分；棘层肥厚计1.0 分；皮突延长、基底层迂曲起伏，根据轻、中、重程度分别计0.5 分、1.0 分、1.5 分；真皮层见有单一核及多形核细胞浸润，根据轻、中、重程度分别计0.5 分、1.0 分、2.0 分；乳头突出明显计0.5分；真皮浅层毛细血管扩张计0.5 分。

2.3.2 豚鼠银屑病样皮损PCNA 含量测定

采用酶联免疫吸附法（ELISA），按照试剂盒操作说明操作，经酶标仪分析得出各组豚鼠耳部皮损中PCNA 含量。

2.4 统计学处理

采用SPSS20.0 统计软件进行计算，各组计量资料均使用（x±s）表示。符合正态分布、方差齐用方差分析，方差不齐采用非参数秩和检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 造模过程中豚鼠耳部皮损变化

见图1-3。

图1 造模前

图2 造模1 周

图3 造模结束

3.2 病理片

皮损组织病理片显示：模型组豚鼠耳组织出现角化不全或角化过度、Muro 微脓疡、颗粒层变薄或消失、炎细胞浸润，真皮浅层血管扩张，真皮乳头突出，提示造模成功（见图5）。

图4 空白组10×20 倍

图5 模型组10×20 倍

3.3 组织病理学Baker 评分

见表1-表2。

表1 空白对照组与模型组Baker 评分值的比较（x±s）

表2 豚鼠银屑病病理Baker 分值（x±s）

3.4 豚鼠耳部皮损部位PCNA 含量

见表3。

表3 各组豚鼠皮损部位PCNA 含量测定

4 讨论

银屑病的发病机制尚未明确，目前认为与多基因遗传因素、多环境因素、免疫及炎症刺激有关，其中细胞及体液免疫功能异常均参与了银屑病的发生和发展[8]。寻常型银屑病根据临床表现，多分为三型[9]，血热内蕴证、血虚风燥证、瘀滞肌肤证。银屑病皮损主要表现为角化不全、细胞更替时间缩短、乳头上方表皮变薄、血管扩张和炎性浸润。本次实验诱导豚鼠银屑病模型，结果显示消银2 号各组均能明显改善皮损组织病理学评分。目前在银屑病的治疗方面，西医传统采用抗肿瘤药物、维A 酸类、角质促成剂、复方甘草酸苷、维生素D3衍生物等药物及物理疗法[10-15]；近年来生物制剂也开始逐步运用于银屑病的治疗[16]，但高昂的费用限制了其广泛推广使用。银屑病严重影响患者质量，目前的治疗措施虽然有效，但不能达到长期的缓解[17]，中医中药在治疗银屑病方面疗效好、副作用少，长期以来被患者广为接受。

消银2 号为叶建州主任医师结合云南本地特色中药，在云南省中医医院皮肤科经过多年的临床运用总结而成。本方由生地黄、熟地黄、丹参、露蜂房、金银花、重楼、白鲜皮、玄参、麦冬、当归、天花粉、乌梢蛇、昆明山海棠组成。临床诊治辨证为血燥证银屑病患者时临症加减，可改善皮损鳞屑增多、干燥等症状，延缓复发。

增殖细胞核抗原（PCNA）与细胞的增殖和分化有关，有文献报道其在银屑病发病中占重要地位，Kawahira[18]研究发现PCNA 在银屑病皮损中高度表达，而经治疗皮损消退后其表达降低，这与本次实验结果相符合。但本次实验阳性对照药当归饮子在降低PCNA 含量方面，与模型组比较（P=0.062），无统计学意义，分析可能与用药时间短、取材及操作误差有关。该方在改善豚鼠银屑病皮损组织病理学Baker 评分方面，与公认的寻常型银屑病血燥证方药当归饮子比较，效果相当（P＞0.05）；在降低皮损PCNA 含量方面，消银2 号优于当归饮子，可降低PCNA 含量，抑制其表达，改善银屑病的发病。综合分析，本实验为寻常型银屑病血燥证的中医辨证组方用药提供了新的思路，同时为消银2 号治疗寻常型银屑病血燥证提供理论基础。

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