张书俊 (南阳市中心医院普外科，河南 南阳 473000)

肝细胞癌病变进展快，转移率高。近来相关研究认为肝细胞癌生物学行为与多种基因和蛋白的表达异常有关〔1〕。整合素连接激酶(ILK)能够参与整合素、生长因子、WNT等信号传导通路，与细胞的持续增殖、黏附性丧失、迁移及血管的生成可能有关〔2〕。NADPH:醌氧化还原酶1(NQO-1)是一种黄素酶，在不同肿瘤的表达不尽相同〔3，4〕，关于NQO-1在肝细胞癌中的表达及其与ILK和增殖细胞核抗原(PCNA)的关系尚未见报道。本研究关注肝细胞癌术后组织中ILK、NQO-1和PCNA的表达，探讨其关系及临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2004年1月至2008年10月我院行肝细胞癌根治手术患者的术后蜡块资料作为观察组79例。纳入均符合WHO中关于肝细胞癌的诊断标准。男40例，女39例;年龄50～79岁，平均65.4岁;高分化40例，中分化16例，低分化23例。术前均未进行放、化疗。同时选取距离肿瘤边缘＞3 cm的正常肝组织55例作为对照组，其中男30例，女25例;年龄51～78岁，平均64.3岁。两组一般资料差异无统计学意义。

1.2 ILK、NQO-1和PCNA蛋白表达的检测方法 ILK、NQO-1和PCNA蛋白的浓缩液均购自美国Santa Cruz公司。枸橼酸抗原修复液、DAB显色试剂等相关试剂盒均购自北京中杉金桥公司。ILK、NQO-1和PCNA依不同比例稀释后进行预实验，并设阳性对照和阴性对照。选择最理想的配比浓度进行正式实验。蛋白的检测应用免疫组化SP法。严格按实验步骤进行操作。严格质量控制。

1.3 ILK、NQO-1和PCNA阳性的判读方法 ILK、NQO-1的阳性表达均位于细胞质中，PCNA的阳性表达位于细胞核中，以出现棕黄色颗粒为阳性反应细胞。计数5个高倍视野，计数总和，以阳性率≥25%为阳性，以阳性率＜25%为阴性。

1.4 统计学方法 应用SAS6.12软件进行t检验、χ2检验。

2 结果

2.1 ILK、NQO-1和PCNA在两组中表达的比较 观察组ILK、NQO-1和PCNA表达的阳性率中明显高于对照组(P＜0.000 1)。见表1。

表1 ILK、NQO-1和PCNA在两组阳性表达的比较〔n(%)〕

2.2 ILK、NQO-1和PCNA的表达与肝细胞癌临床病理特征的关系 观察组中ILK、NQO-1和PCNA的表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、肿瘤最大径及Ki67的表达相关。见表2。

表2 ILK、NQO-1和PCNA的表达与肝细胞癌临床病理特征的关系〔n(%)〕

2.3 肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA表达的关系 ILK和PCNA(r=0.54，P=0.009 7)、NQO-1 和 PCNA(r=0.55，P=0.010 9)的表达均具有正相关性。

2.4 肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表达与患者生存时间的关系 观察组中ILK、NQO-1和PCNA高表达患者的生存时间明显短于低表达患者。见表3。

表3 肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表达与患者生存时间的关系(±s，个月)

表3 肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表达与患者生存时间的关系(±s，个月)

分组 n 生存时间 t值 P值ILK - 29 19.36±4.57 8.98 0.009 2+ 50 10.56±4.50 NQO-1 - 36 18.43±4.56 8.87 0.010 9+ 43 9.98±4.68 PCNA - 9 27.31±4.54 13.51 0.001 2+ 70 11.84±5.25

3 讨论

肝细胞癌的进展快，增殖指数高，转移率高。近来人们关注ILK的表达与肿瘤的关系，并认为ILK对肿瘤的进展有一定促进作用。ILK基因定位于染色体11p5.5～11p15.4，是一种相对分子质量为59 kD的Ser/Thr蛋白激酶，通过介导细胞与细胞外基质的跨膜信号转导，调控机体多条信号转导，参与细胞的生长、增殖、分化及凋亡过程〔5，6〕。有研究认为ILK可以抑制蛋白激酶B的生物学活性，调控细胞周期及细胞的凋亡过程，影响肿瘤的生长〔7〕。NQO-1蛋白是一种胞质黄素酶，其基因定位于16q22染色体，在正常肝细胞中低表达，当其表达升高时，在一定程度上与肿瘤发生相关〔8〕。有研究认为不同NQO-1基因亚型编码的酶类呈现不同的活性〔9〕。如由TT纯合子诱导的NQO-1活性失调，可以引起肝细胞对外源性致肿瘤物质的解毒功能下降〔10〕。也有研究则认为NQO-1可以作为一个氧化应激反应调节因子，对恶性肿瘤的进展起一定的调节作用〔11〕。PCNA是一种非组核蛋白，作为一种细胞增殖的上调因子，通过与周期性蛋白激酶结合引起细胞的增殖过程〔12〕。有学者认为PCNA为DNA聚合酶的辅助因子，直接参与DNA的合成，尤其是DNA增殖及表达失调最明显的肿瘤细胞〔13〕。有学者认为PCNA表达较Ki67要理想，可以囊括Ki67阳性表达的所有细胞，因此其标记增殖更加全面〔14〕。

本实验结果提示ILK、NQO-1和PCNA表达增强对病变进展有明显的促进作用，三种蛋白直接和间接作用均能诱导肿瘤恶变。ILK、NQO-1和PCNA对调节肿瘤的分化有重要价值，分化是细胞由幼稚到成熟的过程，也是细胞恶变的重要过程，调节细胞分化是机体内在的机制，由于蛋白表达失调的明显影响，使肿瘤细胞停滞在低分化或未分化状态，使肿瘤细胞的成熟过程受到更多的影响，也使肿瘤的恶性程度增高〔15，16〕。由于肿瘤的体积与肿瘤的生长密切相关，尤其是生长速度快的恶性肿瘤，而本实验结果显示ILK、NQO-1和PCNA均与肿瘤最大径和肿瘤的TNM分期相关，因此三者在一定程度上参与肿瘤的生长过程。由于以上因素均与肿瘤的预后相关，因此ILK、NQO-1和PCNA的表达可能对判断肿瘤的预后有一定价值，同时ILK、NQO-1和PCNA不同表达患者的生存时间比较的结果直接证实了上述结论，即ILK、NQO-1和PCNA高表达患者的预后差。本实验结果直接证实了ILK、NQO-1对增殖的促进作用，尤其是PCNA与Ki67表达更趋一致性，提示ILK、NQO-1在对肿瘤影响过程中，参与了细胞的增殖过程，尤其是失控性增殖反应过程。本文提示ILK和NQO-1高表达时可以明显刺激细胞增殖，此时PCNA表达升高，肿瘤体积增大。也有观点认为ILK、NQO-1激活后，凋亡信号传导受到影响，正常细胞的不断增殖，而凋亡受到阻滞，细胞逐渐恶变〔17，18〕。

综上，肝细胞癌中ILK、NQO-1和PCNA高表达，对病变的进展有重要影响，术后联合检测ILK、NQO-1和PCNA的表达可能对判断生物学行为和预后有一定价值。ILK、NQO-1对PCNA表达的增殖有直接作用，这可能是两种蛋白的作用机制之一。

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