常向彩,韦国陆，马 明,张声俊,施渺筱,杨晓农

(1.安顺学院农学院,贵州安顺 561000;2.西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都 610041;3.安顺学院资源与环境工程学院,贵州安顺 561000)

虾仁中酸性红73间接ELISA检测方法的建立

常向彩1,2,韦国陆1，+，马 明1,张声俊3,施渺筱1,杨晓农2,*

(1.安顺学院农学院,贵州安顺 561000;2.西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都 610041;3.安顺学院资源与环境工程学院,贵州安顺 561000)

本文采用活性酯法和N,N-羰基二咪唑法分别合成了酸性红73的人工抗原,方阵滴定实验表明活性酯法所得兔抗酸性红73的IgG更适合用于后继实验,以此为基础建立了一种虾仁中酸性红73的间接ELISA检测方法并对反应条件进行了优化。优化后,该方法的半数抑制浓度(IC50)为45.39 μg/L,检测限(LOD)为5.64 μg/L。交叉反应实验结果表明除苏丹红3号(0.15%)外与番红花红、苯酚红、刚果红、碱性品红和胭脂红等其他竞争物无交叉反应。在虾仁中的空白添加回收率范围为71.3% ～ 84.4%,变异系数(RSD)<9.55%。此法可用于虾仁中酸性红73的残留检测,并为进一步制备单克隆抗体和研制快速检测试剂盒奠定了基础。

虾仁,酸性红73,活性酯法,N,N-羰基二咪唑法,ELISA

酸性红73(Acid red 73,AR73)俗称酸性大红GR,相对分子质量为556.48,有中等毒性,强致癌性,遗传毒性[1-3]。在印染业中属禁用“致癌染料”。 有研究表明AR73能以很高的亲和力与人血清白蛋白(HAS)结合从而影响其正常的生理功能[4-5]。因此,世界很多国家已明令禁止在食品中添加,但由于AR73有较强的着色能力,一些食品加工企业仍将其非法作为虾、肉等食品着色剂使用。

目前国内外关于虾仁中AR73检测方法的文献报道较少,2008年,宁尚勇等运用反相液相色谱法建立了测定虾仁中合成色素(酸性大红GR、金黄粉、橙黄G、酸性红1号、酸性红26)的方法,此方法对酸性大红GR的LOD为0.04 μg/g,相关系数大于0.9998[6]。……