金海丹，周宪春，张松男，林贞花，金铁峰*

(延边大学 1.肿瘤研究所; 2.延边大学附属医院 肿瘤科, 吉林 延吉 133002)



Mortalin促进人乳腺癌细胞MDA-MB231的恶性进展

金海丹1#，周宪春1#，张松男2，林贞花1，金铁峰1*

(延边大学 1.肿瘤研究所; 2.延边大学附属医院 肿瘤科, 吉林 延吉 133002)

全球每年有超过100万乳腺癌新发病例，转移是其难治的主要原因。Mortalin又名HSP70，是热休克蛋白(Heat Shock Proteins)家族中的一员，最初发现于鼠胚胎纤维母细胞[1]。肝癌、结直肠癌和卵巢癌等的研究表明，Mortalin在肿瘤发生发展过程中起到了重要的作用，但Mortalin在乳腺癌的研究较少。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition EMT)是肿瘤发生迁移、侵袭，维持干细胞样特征及抗凋亡的关键步骤[2]。本实验旨在研究Mortalin对人乳腺癌MDA-MB231细胞生物学行为的影响，探讨其促进肿瘤恶性进展的可能机制，为临床治疗乳腺癌提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料：MDA-MB231(简称M- 231)细胞系(ATCC)；RPMI 1640培养基、胎牛血清(Gibco公司)、胰蛋白酶(Santa Cruz 公司)；鼠抗人 Mortalin抗体(Sigma公司)。ECL试剂盒(Pierce公司)，基质胶(BD公司)，Transwell板(Corning公司)，EMT相关抗体(Cell signaling公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养及慢病毒转染：人乳腺癌细胞系M- 231置于含10%胎牛血清的1640培养基中，37 ℃、5% CO2常规培养。含人Mortalin的慢病毒载体由上海Genechem公司构建、包装并进行测序证实。用1×107个慢病毒传导单位和空载体的病毒上清液分别感染3×103个M- 231细胞。感染96 h后，用嘌呤霉素(1 mg/L)筛选稳定表达Mortalin的靶细胞。最后利用Western blot法鉴定Mortalin的表达情况。

1.2.2 MTT比色法检测细胞增殖能力：取对数增殖期的M- 231及M- 231/Mor细胞以2×103个/孔接种于96孔板中，每组设5个平行复孔。分别于24、48和72 h后加入50 μL/孔的MTT，4 h后弃上清，加入200 μL/孔的DMSO，轻轻振荡数分钟，应用全波长多功能酶标仪，在570 nm波长处测定其吸光度值，并计算细胞生存率。……