郭金玉，张鹤晓，吴 丹，高志强，张 冉，张乐萃＊

（1.青岛农业大学动物科技学院，青岛 266109；2.北京出入境检验检疫局，北京 100026；3.北京森康生物技术开发有限公司，北京 101400）

牛肠道病毒2型（bovine enterovirus type 2， BEV－2）是小RNA病毒科、肠道病毒属成员［1］，通常引起轻度腹泻或隐性感染，在一定条件下可引发显著症状，影响奶牛的生产性能。BEV－2基因组为单股正链RNA，长为7430bp，仅有一个开放阅读框（ORF），即RNA 5′末端只含有一个翻译起始点，编码2166个氨基酸，经降解产生4种结构蛋白（VP1～VP4）和7种非结构蛋白（2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D）［2］。其中 VP1蛋白能诱导机体产生特异性的中和抗体。

单克隆抗体（McAb）是由一个淋巴细胞分泌的、针对同一抗原决定簇的抗体，它以高度特异性和敏感性在蛋白质的结构与功能研究中发挥着重要作用［3］。

作者利用表达的牛肠道病毒2型VP1＋蛋白（包含整个VP1蛋白基因片段）为免疫原接种小鼠，通过筛选，制备了抗BEV－2的单克隆抗体，建立了BEV－2双抗体夹心ELISA检测方法，为ELISA试剂盒的开发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

BALB／c小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司；新泽西型水泡性口炎病毒（VSV－NJ）由美国NVSL提供；牛肠道病毒2型（BEV－2病毒，毒株BJ001）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和牛白血病病毒（BLV）、SP2／0骨髓瘤细胞均由北京检验检疫局检验检疫技术中心提供；PEG4000购自北京天来生物医学科技有限公司；HAT、HT培养基添加剂、Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Reagents亚型试剂盒购自SIGMA公司；牛肠道病毒2型阳性血清是用病毒免疫阴性牛制备（中和效价为1∶128）；新泽西型水泡性口炎病毒截短的G蛋白（VSV－NJ－G）、羊抗牛IgG－HRP、弗氏不完全佐剂（FIA）、弗氏完全佐剂（FCA）均由动物疫病诊断联合实验室制备。……