孙玉章，何 彪，许运斌，丛彦龙，Karl－Klaus Conzelmann

（1.中国动物卫生与流行病学中心，青岛 266032；2.军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130122；3.浙江大学动物科学学院，杭州 310020；4.吉林大学动物医学学院，长春 130062；5.慕尼黑大学基因中心，慕尼黑81377）

狂犬病（rabies）是由狂犬病病毒（rabies virus，RABV）引起的以侵犯中枢神经系统为主的急性人兽共患传染病，病死率几乎高达100%。据世界卫生组织（World Health Organization，WHO）报道全球每年有约55000人死于狂犬病，其中绝大多数发生在亚洲、非洲等发展中国家［1］。狂犬病病毒是弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）成员，其基因组为不分节段的负链RNA病毒。RABV基因组编码5种结构蛋白，依次为核蛋白（nucleoprotein，N）、磷酸化蛋白 （phosphoprotein，P）、基质蛋白（matrix protein，M）、糖蛋白（glycoprotein，G）和RNA依赖的RNA聚合酶（RNA dependent RNA polymerase，RdRp／L）［2］。目前，学术界一般将狂犬病病毒属划分为7个基因型，其中6个基因型的RABV均以蝙蝠为宿主和媒介生物（基因III型，即MOKV的确切宿主尚未确定），另外还有一些新近分离出的RABV毒株尚待分型［3］。

狂犬病病毒基因组RNA只有与核蛋白形成核糖核蛋白复合物（ribonucleoprotein，RNP）才能在磷蛋白的催化下被RNA依赖的RNA聚合酶蛋白识别并作为转录和复制的模板［4］。因此，经典的RABV的反向遗传操作系统除了构建具有精确末端序列的全长基因组cDNA克隆外，还需要构建表达核蛋白、磷蛋白和聚合酶大蛋白的真核表达质粒共同转染适当的细胞系才可能获得具有感染性的病毒颗粒［5］。

本研究在已建立SAD L16株高效拯救的反向遗传操作平台基础上［6］，以SAD L16株全长基因组cDNA克隆为骨架，利用内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site，IRES）分别构建了5个全长cDNA克隆［7］并直接转染BSR T7／5细胞系，获得了2株重组病毒。……