张大海，蔡忠芳，马海锋

(东阳市人民医院 肿瘤科，浙江 东阳 322100)



华蟾素对晚期肺癌患者血清P53、PTEN及HIF-1α影响研究

张大海，蔡忠芳，马海锋

(东阳市人民医院 肿瘤科，浙江 东阳 322100)

目的 探讨华蟾素对晚期肺癌患者血清P53抗体(serum P53 antibody，P53)、第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome ten，PTEN)蛋白及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1，HIF-1α)的影响及其意义。方法 选取2012年6月～2014年12月于肿瘤科已确诊为晚期肺癌的患者100例，根据随机数字表法随机分为2组：对照组50例，行临床常规疗法治疗；实验组50例，在对照组基础上加用华蟾素0.3 g，3次/天，口服，治疗结束后比较2组患者的血清P53、PTEN、HIF-1α表达水平、肿瘤标志物水平以及生存率和死亡率。结果 与对照组相比，实验组血清P53、HIF-1α表达水平较低(P<0.05)，PTEN表达水平较高(P<0.05)；实验组肿瘤标志物：癌胚抗原(carcionembryonic antigen，CEA)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)、细胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragment，CYFRA21-1)、糖类抗原-125(cancer antigen 125，CA125)水平较低(P<0.05)。实验组生存率较高，死亡率较低(均P<0.05)。结论 华蟾素对晚期肺癌患者具有较好的临床疗效，能调节患者血清P53、PTEN及HIF-1α水平，降低肿瘤标志物指标水平，提高生存率，对临床治疗晚期肺癌具有重要意义。

晚期肺癌；华蟾素；P53；PTEN；HIF-1α

肺癌是高发病率、高死亡率的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康和生命安全，其发病率和死亡率仍呈逐年升高的趋势，引起人们高度关注。研究发现[1]，所有恶性肿瘤中肺癌发病率占居首位，男性发病率和死亡率明显高于女性，与男性为主要吸烟人群有密切关系，调查指出长期大量吸烟会导致肺癌发生率为不吸烟者的10～20倍，且年龄越小的吸烟者，其患肺癌的几率越高。华蟾素是提取自蟾蜍科动物中华大蟾蜍干燥皮的提取物制剂，具有调节免疫、抑制肿瘤细胞DNA合成以及促进肿瘤细胞凋亡的药理作用[2-3]，临床已有将之应用于治疗恶性肿瘤、乙型肝炎等[4]。但将华蟾素应用于晚期肺癌的治疗以及对其血清P53抗体(serum P53 antibody，P53)、第十号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome ten，PTEN)蛋白及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1，HIF-1α)的影响却鲜见报道。因此，本研究通过对晚期肺癌患者应用华蟾素治疗后，检测其血清P53、PTEN和HIF-1α表达水平的变化，为晚期肺癌患者的诊断和治疗提供新的思路和方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例来源选择2012年6月～2014年12月于东阳市人民医院肿瘤科以肺癌晚期为诊断而收入院的患者100例，年龄在20～75岁，采用随机数字表法随机分为实验组和对照组。其中实验组50例，男性32例，女性18例，平均年龄(47.3±8.6)岁；对照组50例，男性29例，女性21例，平均年龄(46.1±8.9)岁。病理分型：实验组小细胞肺癌患者11例，非小细胞肺癌患者39例，其中腺癌23例、鳞癌16例；对照组小细胞肺癌患者13例，非小细胞肺癌患者37例，其中腺癌22例、鳞癌15例。临床分期：实验组ⅢA期16例，ⅢB期24例，Ⅳ期10例；对照组ⅢA期14例，ⅢB期25例，Ⅳ期11例(按TNM分期标准)。所有晚期肺癌患者其临床及影像学诊断均符合诊断标准，且均已丧失手术治疗机会。2组研究对象性别、年龄、病理分型、临床分期等一般资料比较，差异无统计学意义。

诊断及排除标准：参照《中西医结合外科学》[5]教材中关于晚期肺癌的诊断标准而拟定以下纳入标准：①初次入院并诊断为肺癌者；②年龄在20～75岁之间者；③均为肺癌晚期失去手术机会并自愿同意接受本实验者；④实验前2周内未用过任何相关药物治疗者；⑤患者或其家属同意并自愿参与本实验。排除标准：①不愿参与本研究或不符合纳入标准者；②同时患有其他系统肿瘤者；③患有艾滋病、乙肝等具有较重传染性疾病患者；④合并有严重心、肝、肾功能不全疾病患者；⑤对华蟾素过敏者；⑥患有精神类疾病不能配合研究者。

1.2 方法 所有晚期肺癌患者严格按照2010年《中国肺癌临床指南》[6]中关于晚期肝癌的治疗标准予以治疗。

对照组行NP方案化疗，顺铂注射液(锦州九泰药业有限责任公司，批准文号：国药准字H20033936)70 mg/m2，分3d使用；长春瑞滨注射液(江苏豪森药业股份有限公司，批准文号：国药准字H20031377)25 mg/(m2· d)，与第1、8天使用。在治疗过程中，如并发其他临床症状，均予相应的对症处理。以4周为1个周期进行治疗，共化疗2个周期。

实验组在与对照组相同的临床常规治疗基础上加用华蟾素片(安徽金蟾生化股份有限公司，批准文号：国药准字Z34020272)，一次1.2g(3片)，3次/天。共治疗2个周期。

1.3 观察指标及检测方法 对比观察对照组和实验组服用华蟾素片8周前后血清P53、PTEN蛋白和HIF-1α表达水平变化。

血清采集：所有患者治疗前后均采集空腹肘静脉血5 mL，3.8 %枸橼酸钠抗凝，于室温下用水平离心机以3000 r/min离心20 min，待离心结束后将上层血清装入EP管中，放入-80 ℃冰箱中保存备用。

血清指标检测：本研究采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测P53蛋白、PTEN蛋白和HIF-1α表达水平(试剂盒均由郑州安塞生物科技有限公司提供，其操作方法按照说明书严格操作)。

肿瘤标志物指标检测：本研究采用ELISA法检测所有研究对象血清中CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125等肺癌肿瘤标志物指标的浓度水平(试剂盒由郑州安塞生物科技有限公司提供，其操作方法按照说明书严格操作)。以上所有操作均由本院检验科专业人员负责操作。

生存时间统计：治疗结束后随访1年，记录2组患者生存时间。

2 结果

2.1 化疗前后实验组及对照组凝血系统指标水平比较 治疗前2组患者血清P53、PTEN和HIF-1α表达水平相比，差异无统计学意义；经8周治疗后，2组患者血清P53、HIF-1α表达水平均降低，但实验组显著低于对照组(P<0.05)；2组患者血清PTEN表达水平均有升高，但实验组显著高于对照组(P<0.05)。见表 1。

表1 2组患者治疗前后血清P53，PTEN和HIF-1α 表达水平比较， μmol/L)Tab.1 Comparison of P53，PTEN and HIF-1α before and after treatment between， μmol/L)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group before treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.2 2组患者治疗前后血清肺癌肿瘤标志物表达比较 2组患者治疗前血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125水平比较，差异无统计学意义；经8周治疗后，.2组患者血清CEA、NSE、CYFRA21-1、CA125水平较治疗前均有所降低，但实验组显著低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者治疗前后血清肺癌肿瘤标志物水平比较±s， μg/L)Tab.2 Comparison of serum tumor markers of lung cancer between two ±s， μg/L)

*P<0.05，与同组治疗前比较，compared with the same group before treatment；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.3 2组患者1年内生存率和死亡率比较 经随访1年，实验组患者生存率(82.00%)高于对照组(64.00%)，死亡率(18.00%)低于对照组(36.00%)(χ2=4.11，P<0.05)。见表3。

表3 2组患者生存率、死亡率比较[n(%)]Tab.3 Comparison of survival rate and mortality[n(%)]

#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

3 讨论

临床对于早、中期发现的肺癌患者可以通过外科手术切除予以治疗，但大多数肺癌患者在发现时就已处于晚期，丧失手术机会。对于晚期肺癌患者，90%以上需要接受化疗治疗，并能有效延长患者生存时间和改善生活质量。但化疗除能杀死肿瘤细胞外，对人体白细胞和血小板等正常细胞也有损害，并会导致患者食欲不振、恶心、呕吐等消化道症状以及静脉血栓形成等副作用的发生。华蟾素是我国自行研制的二类新药，具有调节免疫功能、抑制肿瘤细胞DNA合成、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成和逆转多药耐药的作用[7]。现代临床已经将华蟾素应用于治疗肺癌、肝癌、食道癌等恶性肿瘤的治疗，并取得了较为满意的临床疗效[8]。但是，华蟾素对晚期肺癌患者血清P53、PTEN和HIF-1α表达水平影响的研究却鲜见报道。

本研究发现，华蟾素能有效降低晚期肺癌患者血清P53和HIF-1α表达水平，升高血清PTEN表达水平。研究发现[9]，P53基因是最常见的抑癌基因之一，分为野生型和突变型2种，野生型P53蛋白能通过其阻滞癌细胞周期和诱发癌细胞凋亡达到抑制癌细胞的作用；突变型P53蛋白并无阻滞癌细胞周期和诱发癌细胞凋亡的作用，反而具有促进癌细胞转化和过度增殖的作用，从而导致肿瘤患者病情加重。有学者研究发现[10]，野生型P53蛋白因其较短的半衰期则很难在血清中检测到，而突变型P53基因则较易于检测，因此本研究患者血清中大量表达的P53基因主要为突变型。研究证实[11]，缺氧是恶性肿瘤普遍存在的现象，也是肿瘤发展过程中的主要环境，HIF-1α是一种在细胞低氧环境下所产生的转录因子，在常氧环境下细胞核内并不能稳定存在，与肿瘤的恶性侵袭、转移和肿瘤患者对化疗抵抗性具有重要意义。PTEN是最早发现具有磷酸酶活性的肿瘤抑制基因，具有够维持机内环境稳态和正常物质代谢的作用。研究发现[12]，PTEN的低水平表达与恶性肿瘤的进展及预后不良有密切联系，它能够直接使磷脂酰肌醇3激酶(PIP3)D3位去磷酸化，是PTEN促进肿瘤细胞凋亡以及抑制肿瘤细胞生长的重要机制之一。表1表明，经2个周期治疗后，实验组患者P53、HIF-1α表达水平显著低于对照组(P<0.05)，其原因可能是实验组患者应用华蟾素后其体内肿瘤细胞的增殖分化以及肿瘤血管得到抑制，并诱导其肿瘤细胞的凋亡，从而病情得到缓解，其血清P53、HIF-1α表达水平亦随之下降，而PTEN水平得到提高可能与华蟾素提高免疫功能有关，且PTEN能抑制HIF-1α表达，PTEN水平的升高可能也是HIF-1α表达水平降低的原因之一。

本研究发现，华蟾素对晚期肺癌患者血清肺癌肿瘤标记物具有明显降低作用，可见应用华蟾素对晚期肺癌患者的治疗具有一定的积极意义。研究发现[13]，CEA是一种细胞表面酸性糖蛋白，对肺癌的辅助诊断具有一定意义；NSE起源于神经内分泌细胞的肿瘤组织异常表达，是具有神经分泌性质的小细胞肺癌最敏感最特异的肿瘤标记物；CYFRA21-1是近年来才被推广的新型肺癌标记物，存在于单层和复层上皮肿瘤细胞的胞浆内，当细胞死亡时溶解的片段释放到血清中，使血清中CYFRA21-1含量升高。研究发现[14]，CA125仅在非小细胞肺癌患者中显著升高，因此可作为非小细胞肺癌的独立预后指标，对预测患者预后具有重要意义。表2表明，经华蟾素治疗后，实验组患者肿瘤标志物水平明显较对照组低(P<0.05)，其原因可能与华蟾素的抗癌作用相关，且从以上的研究结果显示实验组患者生存率高于对照组(P<0.05)，也是实验组患者肿瘤标志物水平降低、症状得到控制的侧面反映。

本研究通过对100例晚期肺癌患者的血清P53、PTEN和HIF-1α表达水平、肿瘤标志物指标以及生存率和死亡率比较分析，证实了华蟾素能够提高晚期肺癌患者生存率、降低死亡率。因此，对于晚期肺癌患者及时正确的应用华蟾素予以治疗具有重要意义。在未来的研究中，将对华蟾素对晚期肺癌患者的血清P53、PTEN和HIF-1α表达水平以及肿瘤标志物作用实质进行更深入的研究，为本实验所得出的结果做出进一步的论证和分析。

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(编校：王冬梅)

Effect of cinobufacin on P53，PTEN and HIF-1α in patients with advanced lung cancer

ZHANG Da-hai, CAI Zhong-fang, MA Hai-feng

(Department of Oncology, Dongyang People’s Hospital, Dongyang 322100, China)

ObjectiveTo investigate the effect of cinobufacin on P53，PTEN and HIF-1α in patients with advanced lung cancer.Methods100 cases with advanced lung cancer were divided into two groups.control group(n=50) were treated with routine treatment, experiment group(n=50) on the base of the control group with 0.3 g cinobufacin,3 times per day oral.P53, PTEN, HIF-1α,tumor marker,survival rate and mortality were compared after the treatment.ResultsCompared with the control group,the serum levels of P53, HIF-1α expression level was lower(P<0.05),PTEN expression level was higher (P<0.05),CEA,NSE,CYFRA21-1,CA125 were lower(P<0.05);the survival rate was higher, the mortality was lower(P<0.05).ConclusionCinobufacin can regulate the advanced lung cancer patients serum P53, PTEN and HIF-1α levels and reduce the tumor markers levels, improve the survival rate.It is of great importance for clinical treatment of advanced lung cancer.

advanced lung cancer; cinobufacin; P53; PTEN; HIF-1α

张大海，男，本科，副主任医师，研究方向：肿瘤放疗，E-mail：dyzdh67@126.com。

R734.2

A

1005-1678(2015)06-0068-03