金乌骨通胶囊中姜黄薄层色谱鉴别方法改进

2015-06-15万红才段萍徐作刚任永奇

医药导报 2015年2期

关键词：薄层姜黄斑点

万红才，段萍，徐作刚，任永奇

(贵州省黔南州食品药品检验所，都匀 558000)

金乌骨通胶囊中姜黄薄层色谱鉴别方法改进

万红才，段萍，徐作刚，任永奇

(贵州省黔南州食品药品检验所，都匀 558000)

目的对金乌骨通胶囊中姜黄薄层色谱(TLC)鉴别方法进行改进。方法采用 TLC法对处方中姜黄进行定性鉴别。结果改进的TLC法可检出姜黄，且专属性强，斑点清晰，阴性无干扰。结论该方法可用于金乌骨通胶囊姜黄TLC鉴别。

金乌骨通胶囊；姜黄素；色谱法，薄层

金乌骨通胶囊由金毛狗脊、乌梢蛇、姜黄、淫羊藿、葛根、补骨脂等多味药组成，具有滋补肝肾、祛风除湿、活血通络的功效。用于肝肾不足、风寒湿痹、骨质疏松、骨质增生引起的腰腿酸痛、肢体麻木等[1]。处方中姜黄有破血行气、通经镇痛之功效[2]，为控制该制剂质量，选择姜黄进行薄层色谱(thin-layer chromatography，TLC)鉴别。原标准中该项TLC鉴别方法展开剂中含苯，按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求，苯是强毒性试剂，需进行苯的替换。经改进方法后，采用低毒或无毒的展开剂，展开效果良好，斑点清晰，阴性无干扰。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SK250LHC超声波清洗器(上海科导仪器有限公司)。梅特勒AG135电子天平。

1.2 试药姜黄对照药材(批号：121188-200502)，购于中国食品药品检定研究院；金乌骨通胶囊(批号：120203，120202，120201)及阴性样品(批号：120506)均由贵州盛世龙方制药有限公司提供；硅胶G预制板(批号：20110712)，青岛海洋化工厂分厂；硅胶G(青岛海洋化工有限公司生产，批号：0110916)；水为纯净水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 姜黄的鉴别研究 (原标准鉴别方法)取本品内容物1.8 g，加无水乙醇10 mL，浸渍过夜，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。另取姜黄对照药材0.1 g，加无水乙醇10 mL，同法制成对照药材溶液。照TLC法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)实验，吸取上述两种溶液各4～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-三氯甲烷-乙醇(49：49：4)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(图1)。

2.2 提取方法的考察分别精密称取金乌骨通胶囊内容物细粉1.0 g，按下述方法处理：①加甲醇20 mL，超声30 min，滤过，滤液浓缩至2 mL，作为供试品溶液；②加乙醇20 mL，超声30 min，滤过，取滤液挥干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液；③加无水乙醇10 mL，浸泡过夜，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液；④加甲醇10 mL，水浴回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液；取缺姜黄的阴性样品0.5 g，照方法①提取，作为阴性对照溶液；取姜黄对照药材0.1 g，照方法①提取，制成对照药材溶液。取上述各供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各4 μL，点于同一硅胶G薄层板上，三氯甲烷-甲醇-甲酸(24：1：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长365 nm)下检视。所显的荧光斑点清晰[2]。结果：方法①主斑点清晰，方法②③主斑点较浅而且背景较深，方法④主斑点清晰但背景较深；阴性对照无干扰。取方法①为姜黄薄层鉴别的提取方法；此方法操作简便，可缩短原标准的提取时间，提高工作效率。

1.姜黄对照药材(批号：121188-200502)；2.金乌骨通胶囊(批号：120203)；3.金乌骨通胶囊(批号：120202)；4.金乌骨通胶囊(批号：120101)；5.缺姜黄的阴性样品

图1 姜黄TLC鉴别图

2.3 展开系统的考察原展开剂中使用强毒性试剂苯，改进后替换为低毒性试剂。①环已烷-乙酸乙酯-甲酸(20：5：0.1)；②三氯甲烷-甲醇-甲酸(20：1：0.2)；③三氯甲烷-甲醇-甲酸(15：5：0.2)；④三氯甲烷-甲醇-甲酸(24：1：0.2)；结果：①主要斑点的分离效果较差；②主要斑点的Rf值太小；③主要斑点的Rf值太大，有拖尾；④主要斑点的Rf值适中，斑点清晰，分离完全；阴性对照无干扰(图2)。故选取展开系统④列入正文。

2.4 耐用性考察按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求，分别进行耐用性考察。①温度的考察：进行低温(4 ℃)、室温(25 ℃)、高温(40 ℃)考察，分离结果均较好。②相对湿度考察：进行低湿度(25%)、中等湿度(50%)和高湿度(75%)的考察，结果表明在上述条件下都能较好分离。③薄层板的考察：选用硅胶G预制板(青岛海洋化工厂分厂，批号：20110712)、自制硅胶G板(青岛海洋化工有限公司生产的硅胶G，批号：0110916)两种薄层板，结果表明均较好。

1.姜黄对照药材(批号：121188-200502)；2.金乌骨通胶囊(批号：120203)；3.金乌骨通胶囊(批号：120202)；4.金乌骨通胶囊(批号：120101)；5.缺姜黄的阴性样品

图2 姜黄采用展开系统④的TLC鉴别图

2.5 改进结果金乌骨通胶囊中姜黄的TLC鉴别方法：取本品内容物1.0 g，加甲醇10 mL，超声提取30 min，放冷，滤过，滤液置水浴上浓缩至2 mL，作为供试品溶液；取姜黄对照药材0.1 g，同法提取，制成对照药材溶液；照TLC法实验，吸取上述溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(24：1：0.2)展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。