王向娟

(杭州市中医院中药房，杭州 310000)

保心宁胶囊中柚皮苷与新橙皮苷的含量测定

王向娟

(杭州市中医院中药房，杭州 310000)

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定保心宁胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量。方法 色谱柱：Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：甲醇-1%冰醋酸(35：65)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：283 nm；进样量10 μL。结果 柚皮苷在0.074～2.210 μg范围内，新橙皮苷在0.077～2.317 μg范围内线性关系良好；柚皮苷的平均回收率为97.73%，RSD为1.66%(n=9)，新橙皮苷的平均回收率为97.23%，RSD为1.24%(n=9)。结论 该方法操作简单，专属性强，重复性好，可用于保心宁胶囊的质量控制。

保心宁胶囊；柚皮苷；新橙皮苷；色谱法，高效液相；含量测定

保心宁胶囊由丹参干浸膏、三七生粉、当归干浸膏、枳壳干浸膏、生姜浸膏混匀、干燥、装胶囊制成，具有活血化瘀、行气止痛的功效，临床用于治疗心绞痛、心律失常，可改善冠心病症状[1]。原标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第11册，仅包括了性状、紫外鉴别、化学显色鉴别及胶囊剂的常规检查，并无含量测定[1]。含量测定项的缺失，无法保证该药的质量，笔者在本实验中以柚皮苷和新橙皮苷为对照，采用高效液相色谱(HPLC)法，对方中的枳壳进行含量测定，以期全面控制该药质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1200系列高效液相色谱仪，包括脱气机(JP73066435)、四元泵(DE62969922)、自动进样器(DE64772263)、柱温箱(DE90374667)、DAD检测器(DEAA304509)；色谱仪工作站采用Chemistation工作站。AG285型电子天平(METTLER TOLEDO公司)。

1.2 试剂与药品 柚皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110722-201111，含量以93.2%计)；新橙皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111857-201102，含量以99.6%计)；保心宁胶囊(武汉双龙药业有限公司生产，批号：110701，110702，110703，采用批号110701样品进行方法学研究)。阴性样品(采用自购药材，模拟工艺制备)。试剂：甲醇为色谱纯，其他为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-1%冰醋酸(35：65)；流速：1.0 mL·min-1，柱温：30 ℃，检测波长：283 nm，进样量10 μL，理论板数按图谱中的柚皮苷峰计算，应不低于3 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取柚皮苷对照品36.83 mg(以柚皮苷计)，新橙皮苷对照品38.62 mg(以新橙皮苷计)，共同置于100 mL量瓶，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液，精密吸取该溶液5.0 mL，置25 mL量瓶，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每毫升溶液中含柚皮苷73.66 μg、新橙皮苷77.24 μg)。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物约0.2 g，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入适量甲醇，超声处理(250 W，33 kHz)20 min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液 按处方量称取各组分，除去枳壳后，按标准中的制法制成阴性样品，取该阴性样品，按照上述供试品溶液的制备方法，制成阴性样品溶液。

2.3 系统适用性实验 分别精密吸取“2.2”项对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL，按照上述色谱条件，注入高效液相色谱仪进行分析，记录色谱图。结果表明，供试品色谱图中分别呈现与对照品色谱图中保留时间相一致的两个色谱峰，柚皮苷和新橙皮苷峰的分离度好，且与相邻色谱峰的分离度均>1.5，阴性样品无干扰。见图1。

2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0 μL注入高效液相色谱仪，以各待测组分的峰面积为纵坐标，各待测组分的进样量(μg)为横坐标进行回归计算，得柚皮苷的回归方程为：Y=816.81X+1.854 0，r=0.999 9(n=7)，得到新橙皮苷的回归方程为：Y=882.51X+4.146 15，r=0.999 9(n=7)。上述实验结果表明：柚皮苷在0.074～2.210 μg范围内，新橙皮苷在0.077～2.317 μg范围内，进样量与峰面积均呈现良好的线性关系。

A.对照品；B.供试品；C.阴性样品；1.柚皮苷；2.新橙皮苷

图1 3种溶液HPLC色谱图

2.5 精密度实验 分别精密吸取“2.2.1”项柚皮苷、新橙皮苷混合对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件，注入高效液相色谱仪进行分析，连续进样6次，记录图谱，分别计算柚皮苷、新橙皮苷峰面积，RSD分别为0.38%和0.46%(n=6)。结果表明本方法的精密度良好。

2.6 稳定性实验 分别精密吸取同一份供试品溶液10 μL，按照上述色谱条件，分别在0，2，4，6，8，10 h各注入高效液相色谱仪进行分析，记录图谱。各图谱中，柚皮苷与新橙皮苷峰面积的RSD分别为1.6%、1.5%(n=6)。上述结果表明，供试品溶液在10 h内峰面积基本稳定。

2.7 重复性实验 取同一批供试品，按“2.2.2”项供试品溶液的制备方法处理，平行制备6份供试品溶液，按上述色谱条件测定，柚皮苷和新橙皮苷的平均含量分别为18.55，19.36 mg·g-1，RSD分别为1.3%和1.6%(n=6)，表明方法重复性较好。

2.8 加样回收率实验 精密称取同一批保心宁胶囊(批号：110701)内容物9份(约0.1 g)，分别置50 mL量瓶，每3份为一组，分别加入对照品储备溶液(每毫升分别含柚皮苷0.368 3 mg、新橙皮苷0.386 2 mg)4.0，5.0，6.0 mL，再各加入甲醇适量，按“2.2.2”中供试品溶液制备方法处理，照上述色谱条件测定，各取10 μL注入高效液相色谱仪，测定柚皮苷与新橙皮苷的含量，计算回收率，结果见表1，2。柚皮苷平均加样加样回收率97.73%，RSD=1.66%，新橙皮苷平均加样回收率97.23%，RSD=1.24%。

表1 柚皮苷加样回收率测定结果

表2 新橙皮苷加样回收率测定结果

2.9 样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定计算，结果见表3。

表3 样品中柚皮苷和新橙皮苷含量测定结果mg·g-1

3 讨论

3.1 测定指标的选择 本品临床上用于治疗心绞痛、心律失常、冠心病等，因此，处方中活血化瘀的丹参、三七被认为是君药、臣药，在质量标准的研究中也以研究丹参、三七的质量控制为主，如原儿茶醛、丹参酮Ⅱ A、丹酚酸B、人参皂苷Rg1等的含量测定[2-8]。但笔者认为，中医理论认为“气为血之帅、血为气之母”，因此在处方的组成中除了生血、活血、祛瘀的药材之外，需要配伍以破气除弊的枳壳，且本品的功效“行气止痛”主要是枳壳发挥药效，枳壳在处方中的作用与其他药材相辅相成，因此很有必要研究枳壳的含量测定项目。柚皮苷与新橙皮苷的活性较强，是枳壳含量测定的指标性成分，因此选择柚皮苷与新橙皮苷对本品中的枳壳进行质控。

3.2 波长的选择 采用二极管阵列检测器对柚皮苷、新橙皮苷进行在线光谱检测，结果显示在283 nm处，两者均有最大吸收，故选用283 nm作为测定波长。

3.3 流动相的选择 笔者比较了《中华人民共和国药典》2010年版中乙腈-磷酸-水、甲醇-冰醋酸-水以及甲醇-水3种流动相，结果甲醇-水系统为流动相峰形较宽，新橙皮苷峰与杂质峰完全无法分开，甲醇-磷酸-水系统中新橙皮苷峰与杂质峰分离效果不佳，如要达到较好的分离效果，新橙皮苷的出峰时间达到70 min，而甲醇-冰醋酸-水溶液系统只要30 min即可达到良好的分离度。且在比较过程中发现，冰醋酸浓度高于0.5%时，柚皮苷与新橙皮苷的峰形以其与杂质峰的分离度均较好，故选择甲醇-1%冰醋酸水溶液系统。

3.4 提取条件的考察 在提取方式上比较了超声处理20，30 min，回流30，60 min几种方法，结果均无明显差异。为了方便操作，选择用甲醇超声20 min即可。在提取溶剂的选择上，比较乙醇、甲醇、50%甲醇的提取效果，结果50%甲醇提取杂质更多，乙醇的提取效果比甲醇略低，故采用甲醇作为提取溶剂。

3.5 耐用性的考察 曾使用了安捷伦公司XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、迪马公司DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)、岛津公司Shimadzu VP-ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)对本品进行分析，结果3种不同品牌C18柱均能在上述色谱条件下得到很好的分离，色谱柱耐用性较好。

本法操作简便，结果准确、灵敏度高，重复性好，可以有效用于本品中枳壳的质量控制。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第11册)[S].1996：142.

[2] 李海泉.高效液相色谱梯度洗脱法同时测定保心宁片中3种皂苷含量[J].中国药业，2000，20(1)：34-35.

[3] 张婷，魏尊喜.RP-HPLC法同时测定保心宁胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量[J].安徽医药，2010，14(5)：531-533.

[4] 陈刚，张全垂，徐连明.高效液相色谱法测定保心宁软胶囊中丹参素的含量[J].时珍国医国药，2006，17(4)：579-580.

[5] 方涛，刘平.高效液相色谱法测定保心宁胶囊中丹酚酸B的含量[J].中国药师，2008，11(2)：202-203.

[6] 崔颖，陆忠祥，吕凌,等.保心宁分散片的薄层鉴别与含量测定方法研究[J].中国实验方剂学杂志，2009，15(6)：18-20.

[7] 李小曲，汪霞.反相HPLC法测定保心宁胶囊中丹参酮ⅡA的含量[J].中国现代药物应用，2008，2(17)：44-45.

[8] 刘玉珍，刘庆荣，钱本余.保心宁胶囊质量标准的研究[J].中成药，1994，16(1)：20-21.

2014-02-13

2014-03-14

王向娟(1984-)，女，浙江义乌人，中药师，学士，研究方向：中药学。电话：(0)15925643819，E-mail：wxj_0807@163.com。

R286；R927.1

B

1004-0781(2015)02-0258-04

DOI 10.3870/yydb.2015.02.032