郦 兴 寿建刚 何 谨 朱滕飞



种植体周围炎患者龈沟液中IL-8、IL-18的水平检测及意义

郦 兴 寿建刚 何 谨 朱滕飞

目的 探讨IL-8、IL-18在种植体周围炎龈沟液(GCF)中的表达及意义。方法 选择2011年1月～2013年12月期间40例种植体周围炎患者为研究对象。另选择健康种植体患者40例。选择健康人群50例为健康对照组。统计3组探诊深度(PD)、龈沟出血指数(SBI)、IL-8、IL-18质量浓度，并对GCF中IL-8、IL-18质量浓度与性别、年龄、PD、SBI进行相关性分析。结果 种植体周围炎组PD、SBI、GCF均高于健康种植体组和对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；但健康种植体组和对照组PD、SBI、GCF差异无统计学意义(P>0.05)；种植体周围炎组IL-8、IL-18水平高于健康种植体组和对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，健康种植体组IL-8、IL-18水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；不同性别种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；≥60岁组IL-8、IL-18水平高于<60岁组和对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，<60岁组IL-8、IL-18水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；GCF 与PD、SBI、IL-8、IL-18呈正相关(P<0.05)；IL-8、IL-18与年龄、PD、SBI呈正相关(P<0.05)；IL-8和IL-18之间呈正相关(P<0.05)。结论 IL-8、IL-18在种植体周围炎患者GCF中呈高表达；GCF中IL-8、IL-18的特异性表达与种植体周围炎密切相关。

种植体周围炎 龈沟液 细胞因子 炎性反应 免疫功能

种植体周围炎是种植体周围组织的炎性反应，可导致患者支持骨丧失，甚至引起种植体脱落，可严重影响患者的口腔健康，对该病尽早诊治对病情的控制和改善具有重要意义[1，2]。口腔炎性疾病时患者体内细胞因子可出现异常表达，表明机体存在一定的炎性反应和免疫紊乱[3]。本研究通过检查种植体周围炎患者龈沟液(gingival crevicular fluid，GCF)中白细胞介素8(IL-8)、IL-18的质量浓度，旨在探讨IL-8、IL-18在种植体周围炎GCF中的表达及意义。

资料与方法

1.一般资料：选择2011年1月～2013年12月期间被笔者医院收治的50例种植体周围炎患者为研究对象，符合种植体周围炎的诊断标准[3]，患者年龄20～70岁，平均年龄为39±4岁，男性23例，女性27例。另选择同期被笔者医院收治的健康种植体患者50例，患者年龄21～65岁，平均年龄为40±4岁，男性22例，女性28例。选择同期在笔者医院门诊体检的健康人群50例为健康对照组，患者年龄19～65岁，平均年龄37±3岁，男性22例，女性28例。3组在年龄、性别等方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究均获受试者知情并签署知情同意书。

2.纳入排除标准：(1)纳入标准[3]：患者年龄16～35岁；符合种植体周围炎的诊断标准；无全身系统疾病；近半年内未接受牙周治疗、未服用抗生素；无其他原发脑部器质性病变；知情同意。(2)排除标准[3]：有种植体周及牙周组织疾病治疗史者；有精神疾病史；有酒精、药物滥用史；近半年内服用免疫抑制剂、避孕药者；孕妇；吸烟者；未完成随访者。

3.研究方法：(1)GCF的采集：将Whatman 3号滤纸裁成宽2mm×20mm的纸条，置于干净容器中备用。采集GCF：用无菌干棉球擦干牙面，隔湿，去除较大的菌斑，轻吹牙龈，将制备好的滤纸条插入种植体颊侧近远中、舌(腭)侧近远中龈沟中，1min后取出，用游标卡尺测量并记录浸湿长度，剪去干燥部分，置于装有1ml生理盐水的Eppendorf管中，每管含1个样本的4条滤纸，离心半径8cm，10000r/min，4℃离心10min，取上清液，-70℃冷冻保存。(2)GCF定量:将健康者血清0.1～2.0μl分为20组(以0.01μl递增)，用 5μl进样器取各组标准量血清滴于相同的Whatman 3号滤纸条，每组3条滤纸，游标卡尺测量滤纸浸湿长度。根据健康者血清量与滤纸浸湿面积的标准曲线计算GCF量，经计算，正常人血清体积与滤纸浸湿面积呈直线线性相关(r=0.978，P=0.000)。(3)标本检测:室温下解冻标本20min，1000r/min离心10min，取上清液，采用双抗体夹心ELISA法检测所有受试者GCF中IL-8、IL-18含量，试剂盒购自于上海华大科技有限公司。严格按照说明书操作[1]。(4)统计指标:统计3组探诊深度(PD)、龈沟出血指数(SBI)、受试者GCF中IL-8、IL-18质量浓度，并对GCF中IL-8、IL-18质量浓度与性别、年龄、PD、SBI进行相关性分析。

4.统计学方法:使用SPSS 19.0软件，计量资料执行t检验或单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，相关性分析采用Pearson检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1.3组患者PD、SBI、GCF:3组间PD、SBI、GCF的比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，3组间PD、SBI、GCF差异有统计学意义；种植体周围炎组PD、SBI、GCF均高于健康种植体组和对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；但健康种植体组和对照组PD、SBI、GCF差异无统计学意义(P>0.05，表1)。

表1 3组患者PD、SBI、GCF比较

与健康种植体比较,**P<0.01；与对照组比较,##P<0.01

2. 3组GCF中IL-8、IL-18质量浓度:3组间比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验，3组间IL-8、IL-18水平存在明显差异；种植体周围炎组IL-8、IL-18水平高于健康种植体组和对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，健康种植体组IL-8、IL-18水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，表2)。

表2 3组GCF中IL-8、IL-18水平比较

与健康种植体比较,**P<0.01；与对照组比较,##P<0.01

3.不同性别种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18水平:50例种植体周围炎患者中，男性23例，女性27例，组间两两比较采用SNK-q检验，检测结果显示，不同性别种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比较，差异无统计学意义(P>0.05，表3)。

表3 不同性别种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比较

与对照组比较，**P<0.01

4.不同年龄段种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18水平:将50例种植体周围炎患者按照年龄段分为≥60岁组(20例)和<60岁组(30例)两组。组间两两比较采用SNK-q检验，不同年龄段种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比较差异有统计学意义，≥60岁组IL-8、IL-18水平高于<60岁组和对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，<60岁组IL-8、IL-18水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01，表4)。

表4 不同年龄段种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比较

与<60岁组比较，**P<0.01；与对照组比较，##P<0.01

5.GCF中IL-8、IL-18的表达与性别、年龄、PD、SBI的相关性分析:采用Pearson检验对GCF中IL-8、IL-18表达与性别、年龄、PD、SBI进行相关性分析，GCF 与PD、SBI、IL-8、IL-18呈正相关(P<0.05)；IL-8、IL-18与年龄、PD、SBI呈正相关(P<0.05)；IL-8和IL-18之间呈正相关(P<0.05，表5)。

表5 GCF中IL-8、IL-18的表达与性别、年龄、PD、SBI的相关性

讨 论

IL-8可由巨噬细胞、内皮细胞等多种细胞分泌，是一种重要的炎性因子，具有多重作用，既可介导炎性反应过程，亦可诱导内皮细胞增殖和迁移，促进血管生成[3]。IL-8作为介导炎症进展的重要细胞因子，与口腔炎性疾病的发病密切相关，在口腔炎性疾病的发病过程中亦起重要作用[4～6]。本研究检测种植体周围炎患者GCF中IL-8含量，实验结果显示，种植体周围炎患者GCF中IL-8的检测含量明显高于健康种植体者和健康人群。与Severino等[3]的报道基本一致。健康人群GCF中无明显炎性反应，因此GCF中IL-8可正常表达；本研究中健康种植体患者IL-8检测含量高于健康人群，表明其亦存在一定的炎性反应，但相较种植体周围炎患者，健康种植体患者炎性反应较弱，因此其GCF中IL-8质量浓度检测结果介于健康人群与种植体周围炎患者之间，这表明IL-8与种植体周围炎的发生密切相关[3，7]。

IL-18为近年来发现的白介素因子，其具有免疫调节功能，可参与机体免疫反应[8]。近年来研究发现，IL-18在口腔疾病中可出现异常表达，与口腔相关炎症性疾病的发病密切相关。本研究检测种植体周围炎患者GCF中IL-18含量，实验结果显示，种植体周围炎患者GCF中IL-18检测含量高于健康种植体患者和健康人群。健康人群和健康种植体患者GCF中无炎性反应或炎性水平较弱，因此GCF中IL-18可正常表达或表达水平介于健康人群与种植体周围炎之间[9]。而种植体周围炎患者存在免疫紊乱和炎性反应，因此IL-18可出现高表达，表明种植体周围炎患者体内存在由IL-18诱导的免疫激活，IL-18的表达状况与种植体周围炎的发生同样密切相关，推测可能机制为，IL-18通过调节血中5-HT水平变化进而激活免疫反应[9，10]。

本研究中不同性别的种植体周围炎患者之间GCF中IL-8、IL-18的检测含量并无显著差异，但不同年龄段的种植体周围炎患者GCF中上述指标检测含量存在明显差异，表明种植体周围炎中IL-8、IL-18等指标的表达与性别无相关性，但与年龄有关，相关性结果亦进一步证实了这一点。60岁以上的种植体周围炎患者GCF中IL-8、IL-18的表达存在异常，分析可能与以下因素有关：老年人群本身免疫功能已经开始减退，相较60岁以下人群，发生炎性反应时老年患者免疫紊乱和炎症程度较重，因此GCF中上述指标检测结果存在明显异常。

本组资料相关性分析结果显示，PD、SBI与IL-8、IL-18、GCF呈正相关，IL-8、IL-18的表达之间呈正相关。表明上述指标之间存在较为复杂的相关性，在种植体周围炎中IL-8、IL-18等指标可能并不单独起作用。种植体周围炎患者GCF中IL-8检测水平越高，IL-18表达亦增强，即IL-8、IL-18均呈高表达，表明机体所产生的炎性反应越剧烈，免疫紊乱越严重，表现为种植体周围的PD和SBI越显著[11]。

国内有关GCF中IL-8、IL-18表达与种植体周围炎之间的研究较少，因此本研究具有一定的创新性。IL-8、IL-18在种植体周围炎患者GCF中呈高表达；GCF中IL-8、IL-18的特异性表达与种植体周围炎密切相关。

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11 Heasman P，Esmail Z，Barclay C．Peri-implant diseases[J].Dent Update，2010，37(8)：511-516

(修回日期：2015-03-16)

IL-8,IL-18 Expression in Peri-implant Gingival Crevicular Fluid and Clinical Significance.

LiXing,ShouJiangang,HeJin,etal.

ShaoxingCentralHospitalofZhejiang,ShaoxingHospitalofChinaMedicalUniversity,Zhejiang312030，China

Objective To study IL-8,IL-18 expression in peri-implantitis gingival crevicular fluid and clinical significance. Methods Between January 2011 and December 2013, 40 patients with peri-implantitis were selected as the research object. 40 cases of healthy implant patients were selected. 50 cases of healthy people healthy were selected as the controls. The probing depth (PD), sulcus bleeding index (SBI), GCF IL-8,IL-18 mass concentration in the three groups were tested, and correlation analysis between IL-8,IL-18 mass concentration in GCF and gender, age, PD and SBI were made. Results PD and SBI, GCF in peri-implant group were higher than healthy implant group and the control group, and the difference was statistically significant (P<0.01). But the PD and SBI, GCF of healthy implant group and the control group B had no obvious difference (P>0.05); IL-8,IL-18 in peri-implant group was higher than healthy implant group and the control group, and the difference was statistically significant (P<0.01). IL-8,IL-18 levels in healthy implant group was higher than the control group, and difference was statistically significant(P<0.01). Peri-implant patients with different gender in GCF IL-8,IL-18 levels, and there was no statistically significant difference (P>0.05). IL-8,IL-18 levels of patients whose ages were 60 or higher in peri-implant group were higher than the < 60 years old group and the control group,and the difference was statistically significant (P<0.01).IL-8,IL-18 levels in the < 60 years old group were higher than the control group, and difference was statistically significant (P<0.01). The GCF was positively correlated with PD, SBI, IL-8, IL-18 (P<0.05). IL-8, IL-18 was positively correlated with age, PD, SBI (P<0.05).There was a positive correlation between IL-8 and IL-18 (P<0.05). Conclusion IL-8,IL-18 show high expression in GCF in peri-implantitis. The specific expressions of IL-8,IL-18 in GCF are closely related to peri-implantitis.

Peri-implantitis; Gingival crevicular fluid; Cytokines; Inflammatory reaction; Immune function

312030 中国医科大学绍兴医院口腔科

R78

A DOI 10.11969/j.issn.1673-548X.2015.10.044

2015-02-04)