青蒿多糖对免疫抑制小鼠免疫器官的影响

2015-06-11帅学宏陈吉轩黄庆洲胡庭俊

动物医学进展 2015年11期

帅学宏，施君，陈吉轩，黄庆洲，伍莉，胡庭俊＊

（1.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆402460；2.广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005）

多糖具有免疫调节，降血脂，抗肿瘤，抗氧化，抗衰老，抗病毒等多种生物活性［1－5］。作为免疫调节剂，它可以通过多种途径调节机体的免疫功能［6－12］。本试验选用环磷酰胺建立免疫功能抑制小鼠模型，用青蒿多糖对模型小鼠进行处理，从组织形态学上观察胸腺与脾脏的结构变化，探讨青蒿多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物昆明种小鼠60只，SPF级，体重为18g～22g，健康，雌雄各半，购自于广西医科大学动物实验中心。

1.1.2 主要试剂及药品注射用环磷酰胺，上海恒瑞医药股份有限公司。生理盐水、甲醛、冰醋酸均为国产分析纯。青蒿多糖，由广西大学动物科学技术学院药理研究室提供。

1.1.3 主要仪器及设备 AB104－L 分析天平，瑞士梅特勒公司产品；DK－98－Ⅱ型电热恒温水浴锅、尼康YS100生物显微镜，购自天津泰斯特仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 动物处理及采样将60只昆明种小鼠随机分成6组，每组10只，雌雄各半。待小鼠适应3d后进行正式实验。Ⅰ组为生理盐水组，上午每只注射0.5mL生理盐水，下午注射等量生理盐水；Ⅱ组为免疫抑制组，上午每只注射0.5mL 生理盐水，下午注射等量环磷酰胺使其终剂量达到40mg／kg；Ⅲ组到Ⅵ组为免疫抑制加不同剂量青蒿多糖组，上午每只均注射0.5 mL 青蒿多糖，使多糖的终剂量分别为25、50、100、150 mg／kg，下午注射等量环磷酰胺使其终剂量达到40 mg／kg，以上处理均为腹腔注射，连续处理7d。于末次给药后次日，对所有小鼠进行称重。颈椎脱臼处死小鼠，取胸腺和脾脏称重，并计算脏器指数。将胸腺、脾脏浸泡在波恩固定液中固定，制作石蜡切片，HE 染色，光学显微镜下观察。

1.2.2 结果处理小鼠的脏器指数的计算［13］：胸腺指数＝胸腺重量（mg）／小鼠体重（g）；脾脏指数＝脾脏重量（mg）／小鼠体重（g）。用SPSS17.0软件进行统计学分析，试验所得数据用平均值±标准差表示，单因素方差分析检验差异显著性。P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。用显微镜观察组织切片的形态变化。

2 结果

与对照组相比，环磷酰胺可极显著降低小鼠的胸腺指数和脾脏指数（P＜0.01）。与免疫抑制模型组相比，使用青蒿多糖的各组对环磷酰胺降低的胸腺指数均无明显的升高作用；而50、100、150mg／kg剂量青蒿多糖可对环磷酰胺降低的脾脏指数有不同程度的升高作用（P＜0.05或P＜0.01）（表1）。

表1 青蒿多糖对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响Table 1 Effects of HAAP on thymus and spleen indexes in mice

空白对照组胸腺的皮质与髓质分界清楚（图1A）；环磷酰胺组的胸腺分叶模糊、皮质与髓质分界不清楚、皮质变薄（图1B）；Cy和25mg／kg多糖联用组胸腺分叶不明显，皮质与髓质分界清晰，间质与空白对照组类似，皮质变厚（图1C）；Cy和50mg／kg多糖联用组胸腺分叶不明显，皮质与髓质分界较模型组清晰（图1D 中白色箭头），皮质略有萎缩，间质较空白对照组增宽但不及模型组（图1D 中黑色箭头）；Cy和100mg／kg、150mg／kg多糖联用组胸腺分叶不明显，间质未明显增宽（图1E，图1F）。

图2中空白对照组皮质部胸腺细胞密集（图2A中白色箭头），髓质部有较多胸腺细胞（图2A 中黑色箭头）。环磷酰胺组胸腺细胞稀疏（图2B 中白色箭头）。Cy和25mg／kg多糖联用组皮质部胸腺细胞密集（图2C中白色箭头），髓质部可见较多的胸腺细胞（图2C中黑色箭头）。Cy和50mg／kg多糖联用组皮质多见胸腺细胞（图2D 中白色箭头），髓质胸腺细胞也增多（图2D 中黑色箭头）。Cy和100mg／kg、150mg／kg多糖联用组皮质胸腺细胞（图2E 和图2F中白色箭头）和髓质胸腺细胞（图2E 和图2F中黑色箭头）均较免疫抑制组的多。

由图3可见空白对照组的脾小体较大，数量较多（图3A 中白色箭头），中央动脉周围淋巴鞘面积较大（图3A 中黑色箭头）；环磷酰胺组脾脏白髓和红髓分界不清晰，脾小体数量较少，体积较小（图3B）；给青蒿多糖的各组脾脏白髓和红髓分界随着多糖浓度的增多而变得清晰，脾小体保持完整，较免疫抑制组的大（图3C～图3F）。

图1 小鼠胸腺组织显微结构（HE，40×）Fig.1 Thymus tissue microstructure of mice（HE，40×）

图2 小鼠胸腺组织显微结构（HE，400×）Fig.2 Thymus tissue microstructure of mice（HE，400×）

图4可见，空白组中央动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞密集（图4A 中白色箭头所示为中央动脉，黑色箭头所示为中央动脉周围淋巴鞘），环磷酰胺组的较对照组稀疏（图4B 中白色箭头所示为中央动脉，黑色箭头所示为中央动脉周围淋巴鞘）。给青蒿多糖的各组中央动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞较免疫抑制组的密集（图4C～图4F 中白色箭头所示为中央动脉，黑色箭头所示为中央动脉周围淋巴鞘）。

图3 小鼠脾脏组织显微结构（HE，40×）Fig.3 Spleen tissue microstructure of mice（HE，40×）

图4 小鼠脾脏组织显微结构（HE，400×）Fig.4 Spleen tissue microstructure of mice（HE，400×）

3 讨论

免疫抑制剂如环磷酰胺等药物可导致免疫器官发生萎缩使小鼠免疫器官指数降低，外周血中淋巴细胞数量减少，从而使小鼠细胞免疫功能受到严重的抑制。环磷酰胺属于细胞周期非特异性化疗药物，对增殖周期中各期血细胞均有杀灭作用，其在杀伤异常细胞的同时，可损伤机体的免疫器官，抑制机体的体液免疫和细胞免疫［14－15］。研究表明多糖可显著增强免疫低下动物的免疫功能，促进健康动物的免疫器官发育，增加其免疫器官指数［16－20］。本试验采用环磷酰胺建立免疫抑制模型后，小鼠胸腺指数和脾脏指数显著降低。胸腺分叶模糊、皮质与髓质分界不清楚、皮质变薄，胸腺细胞稀疏。脾脏的红髓和白髓分界不清晰，脾小体数量较少，体积较小，中央动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞较空白组稀疏，表明环磷酰胺对小鼠脾脏和胸腺有抑制作用，成功建立了免疫抑制模型。25 mg／kg青蒿多糖可使免疫抑制组小鼠胸腺皮质与髓质分界清晰，间质与空白对照组类似，皮质变厚。皮质部胸腺细胞密集。50 mg／kg青蒿多糖作用于免疫抑制组后，胸腺皮质与髓质分界较模型组清晰，间质较空白对照组增宽但不及模型组，皮质多胸腺细胞，髓质胸腺细胞也增多。100mg／kg和150mg／kg青蒿多糖作用于免疫抑制组后，胸腺分叶不明显，间质未明显增宽，皮质胸腺细胞和髓质胸腺细胞均较免疫抑制组的多。各种剂量青蒿多糖组的脾脏白髓和红髓分界随着多糖浓度的增多而变得清晰，脾小体保持完整，较免疫抑制组的大。中央动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞较免疫抑制组的密集。这与之前报道的有关多糖对免疫抑制小鼠免疫功能调节的研究结果相似［21－23］。结果提示，青蒿多糖对环磷酰胺造成的脾脏和胸腺免疫功能抑制有较好的改善作用，在一定程度上青蒿多糖能提高环磷酰胺所致免疫功能抑制小鼠的免疫功能。

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