赖金龙，付倩，任莎，吴国，陶宗娅,*，张红，罗学刚

1.四川师范大学生命科学学院，成都 610101 2.西南科技大学 教育部生物质材料教育部工程研究中心，绵阳 621010

检测细胞DNA断裂损伤效应的彗星实验法的改良

赖金龙1，付倩1，任莎1，吴国1，陶宗娅1,*，张红1，罗学刚2

1.四川师范大学生命科学学院，成都 610101 2.西南科技大学 教育部生物质材料教育部工程研究中心，绵阳 621010

为了解决彗星实验过程中常出现的脱胶、细胞核分离操作繁琐、重复性低等问题，对彗星实验方法进行了改良，初步建立了彗星实验的快速操作流程。结果显示，通过对载玻片进行预处理，可确保凝胶悬挂均匀；采用改良机械法分离的细胞核浓度适中；以0.5%(w/v)涂层琼脂糖作为基层、以1.5%(w/v)低熔点包埋琼脂糖作为叠加层的“双层凝胶法”，辅以“推片法”铺胶，操作便捷且不发生脱胶现象；细胞核膜经裂解处理后再进行电泳和荧光观察，彗星图像清晰，杂质少。应用改良后的彗星实验方法，操作简便，耗时更短，实验效果良好，可快速检测出细胞DNA损伤效应。

铯；蚕豆根尖细胞；遗传毒性；DNA损伤；彗星实验；改良

彗星实验(comet assay)也称单细胞凝胶电泳实验(single cell gel electrophoresis,SCGE)，是一种操作简单、有效评估细胞DNA损伤的方法[1]。其原理是器官或组织细胞受外源因素(如辐射、重金属等)影响，细胞中的DNA发生单链或双链断裂，经裂解后，DNA解旋，在电场作用下，DNA断片迁移出细胞核，形成彗星状的电泳图谱；而正常细胞的大分子量DNA在电场作用下迁移距离较短，DNA仍保留在细胞核的范围，形成圆形或轻微拖尾的图谱[2]。……