杨江媛

【摘要】目的：考察猫须草的最佳醇提取工艺。方法：以猫须草提取物中总黄酮的含量为指标，对不同的提取方法及提取工艺进行考察，以确定猫须草的最佳提取工艺。结果： 95%的乙醇提取烘干的水提药渣，乙醇用量为15BV/次，提取次数为2次，每次2.5h。提取方法经过中试放大试验后干粉收率达到20%以上，总黄酮达到70%以上。结论：收率较好，该工艺条件可行。

【关键词】猫须草；总黄酮；提取工艺；收率.

【中图分类号】R284.2【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）10-0020-02

猫须草Clerodendranthus spicatus （Thunb.）C. Y. Wu又名肾茶、牙努秒、猫须公，为唇形科肾茶属植物。我国猫须草主要分布于广东、海南、广西南部、云南南部、台湾及福建，常生于林下潮湿处。从上世纪起，我国多地引种栽培，其中以云南种植最多[1] 。猫须草是一种药食两用的植物，具有利尿、抗菌、消炎、溶石、排石和抗肿瘤等多种药理学作用[2] 。有文献报道猫须草中的主要化学成分为黄酮类、酚性化合物、二萜类、三萜类、木脂素类等，其中黄酮类化合物为其主要脂溶性化合物[3-4] 。为提高猫须草有效成分提取效率，本实验以乙醇为提取溶剂，对猫须草的提取工艺进行研究和优化，为猫须草的优质开发利用提供理论依据。

1材料

1.1试验器材电子天平（十万分之一，赛多利斯科学仪器有限公司）；电子天平（万分之一，赛多利斯科学仪器有限公司）；NKSY型智能恒温水浴锅（常州诺基仪器有限公司）；36952型紫外分光光度计（菲尔伯恩实业发展有限公司）；昆山超声清洗仪（安徽东南仪诚试验室设备有限公司）；R-1001-L旋转薄膜蒸发仪（郑州长城仪器有限公司）；SHZ-D型真空泵（郑州博科仪器设备有限公司）

1.2对照品芦丁（中国食品药品检验所，批号：121268-200904）。

1.3药材猫须草水提取后低温干燥的药粉。

2方法与结果

2.1总黄酮含量测定方法

2.1.1对照品溶液制备精密称取芦丁对照品16.42mg，甲醇适量置水浴上微热使溶解，放冷，甲醇定容至50ml，摇匀，即得浓度为0.3284mg/ml的芦丁对照品溶液。

2.1.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.5、1、1.5、2、3、4、5、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应的试剂为空白，按紫外-可见分光光度法（附录ⅤA），在509nm波长处测定吸光度。

以芦丁含量（μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出总黄酮的标准曲线为：Y=0.0107X+0.0012，R2=0.9993，线性范围为6.568～78.816μg/ml。

表1总黄酮含量测定标准曲线的绘制

芦丁含量/μg/ml吸光度芦丁含量/μg/ml吸光度

6.5680.07039.4080.416

13.1360.14252.5440.555

19.7040.21465.6800.715

26.2720.29578.8160.849

2.1.3供试品制备称取浸膏适量，精密称定，置25 ml锥形瓶中，加甲醇10 ml超声处理10 min，放冷，精密称定，甲醇补足重量，摇匀。精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3ml，置25 ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6 ml”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度（μg/ml），计算即得。

2.1.4醇提液供试品溶液的制备称取各个单因素考察后的干浸膏约0.05g至锥形瓶中，精密称定，甲醇30ml浸泡1h，超声提取30 min，放冷，过滤，回收滤液至10ml，用0.45μm的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.2提取工艺考察

2.2.1乙醇浓度取水提后烘干的药渣10g，分别加入10倍量浓度为55%、65%、75%、85%、95%的乙醇溶液浸泡药渣2h后，80℃加热回流2h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，称定浸膏量及测定总黄酮含量，结果见表2。

表2醇提浓度考察

醇提浓度/%干浸膏含量/g总黄酮含量/%加权评分

550.40110.660.5306

650.40250.650.5262

750.41420.710.5621

850.41190.710.5610

950.39970.730.5648

由上表数据，当用95%的乙醇提取药渣时，总黄酮含量最高，此时的加权评分最高，因此选择95%的乙醇提取水提药渣。

2.2.2乙醇用量取水提后烘干的药渣10g，按照提取工艺，分别加入6、8、10、12、15倍量浓度为95%的乙醇溶液浸泡药渣2h后，80℃加热回流2h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，称定浸膏量及测定总黄酮含量，结果见表3。

表3乙醇用量考察

醇提用量/BV干浸膏含量/g总黄酮含量/%加权评分

60.41550.690.5528

80.44250.690.5662

100.44830.720.5842

120.44170.750.5958

150.45000.770.6100

由上表数据，随着乙醇用量的增加，加权评分越高，提取药材时每次选择15倍量的乙醇为最适提取用量。

2.2.3提取时间取水提后烘干的药渣10g，按照提取工艺，加入15倍量浓度为95%的乙醇溶液浸泡药渣2h后，分别80℃加热回流0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，称定浸膏量及测定总黄酮含量，结果见表4。

表4醇提时间考察

醇提时间/h干浸膏含量/g总黄酮含量/%加权评分

0.50.42530.770.5976

1.00.43210.780.6060

1.50.43950.790.6148

2.00.44170.850.6458

2.50.44520.880.6626

由上表数据，乙醇提取时间越长，浸膏含量越高，加权评分越大，但随着提取时间的增加，经济成本增加，因此本工艺选择乙醇提取时间为每次2.5h。

2.2.4醇提优选试验方案由以上单因素考察的结果可知，药材的醇提最佳提取工艺条件为：95%的乙醇提取烘干的水提药渣，乙醇用量为15BV/次，提取次数为2次，每次2.5h。

2.3乙醇提取小试结果取水提后烘干的药渣5份，每份10g，加入15倍量浓度为95%的乙醇溶液浸泡药粉1h后，分别80℃加热回流2.5h，过滤，收集滤液，滤渣同法提取1次，合并滤液，减压回收溶剂至干，测定浸膏出膏率及总黄酮含量，结果见表5。

表5醇提小试结果

提取药材编号干浸膏含量/g总黄酮含量/%加权评分

10.4250.710.568

20.4450.720.582

30.4360.780.608

40.4100.690.550

50.4290.750.490

均值0.4290.730.560

RSD/%3.044.847.92

由小试结果看出，醇提取工艺重复提取5份药材RSD值满足要求，表明该提取工艺稳定可行。

3结论

3.1猫须草中化合物的类型主要为总黄酮及黄酮苷类化合物，其中脂溶性成分主要为黄酮类化合物，因此本实验在水提取后的基础上，将水提取后的药材烘干后再用醇提取能得到纯度较高的醇提取物。

3.2采用紫外分光光度法对猫须草中总黄酮含量进行测定，操作简单、准确度高、重现性好，所建立的标准曲线线性范围能满足同时测定药材、水提取物、醇提取物中总黄酮的含量。

猫须草是我国西南地区特有的少数民族药，经过长期实践，猫须草在治疗泌尿系统疾病方面具有显著的疗效。然而，由于缺乏系统完整的研究，大多数民族药还停留在地区甚至更小的范围内用药，一些具有显著疗效的民族药还没有得到充分的推广使用。对猫须草提取工艺的研究，不仅有利于民族医药的推广使用，而且也对民族医药的发展起到极大的推动作用。

参考文献

[1] 许娜，许旭东，杨峻山. 猫须草的研究进展[J] .中草药，2010，41（5）：12-16.

[2] 任文辉，洪俪芳.猫须草的药理作用研究进展[J] .中草药，2013，44（20）：2946-2950.

[3] 高增平，王宝华，江佩芬.不同产地猫须草化学成分预试及熊果酸含量对比[J] . 北京中医药大学学报，1999，22（5）：78-79.

[4] 颜文祝，吕于谋，沈文通.猫须草主要化学成分初步预试[J] .海峡药学，1995，7（3）：3-4.

（收稿日期：2015.03.03）